活动期Vogt-小柳原田综合征患者体内MDMs细胞线粒体受损及ROS产生水平与静止期Vogt-小柳原田综合征患者、AAU患者和正常人相比明显升高;poly I:C和LPS可以使各组MDMs细胞线粒体受损及ROS产生水平明显增高,并且活动期Vogt-小柳原田综合征患者升高水平明显高于其它组;anti-TLR3/anti-TLR4可以明显降低poly I:C/LPS对MDMs细胞线粒体损伤和ROS产生的作用;rotenone可以明显升高MDMs细胞ROS产生水平及IL-1β产生水平,而DPI可以明显降低MDMs细胞ROS产生水平及IL-1β产生水平。 和 4.基因沉默炎症小体NLRP3后,各组IL-1β产生水平显著降低。 5. ROS通过激活p38和ERK1/2信号通路进而激活炎症小体NLRP3,从使IL-1β产生增多。
结论: 我们的结果显示:TLR3/4在活动期Vogt-小柳原田综合征患者MDMs细胞中表达明显升高。TLR3/4与其配体poly I:C/LPS相互作用可以通过使线粒体产生ROS增多,激活炎症小体NLRP3,进而使IL-1β产生增多引起炎症反应。
紫锥菊(Echinacea purpurea)是近年来备受关注的一种安全、高效多功能药用植物,其具有强大的免疫调节活性。巨噬细胞和树突状细胞(dendritic cell, DC)同为机体免疫系统的重要成员,前者具有吞噬、分泌、组织修复、抗原递呈等多种功能,后者为专职抗原提呈细胞并能分泌多种细胞因子,两者均在非特异性免疫(先天性免疫)和特异性免疫(获得性免疫)中有重要作用。Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)主要表达于巨噬细胞和DC,该类受体在识别配体后,既能够通过激活炎症因子和I型IFN分泌,启动非特异性免疫反应,又可以通过促进DC成熟并递呈抗原,启动特异性免疫反应。因此,本研究拟先以小鼠为研究材料,探讨紫锥菊提取物(Echinacea purpurea extract, EE)对其机体免疫功能和抗沙门氏菌感染能力的影响,再以小鼠巨噬细胞和DC为研究对象,研究EE对两者免疫功能的影响以及TLR信号通路在此免疫调节活动中的作用,最终结合两方面的研究结果,阐明EE调控小鼠细胞和机体免疫功能以及抗沙门氏菌感染能力的机理。主要研究内容及结果如下:
(一)EE对小鼠机体免疫功能和抗沙门氏菌感染能力的影响 50只体重相近的C57BL/6雌性小鼠被随机分为5组,对照组、EE组、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella enterica serovar Typhimurium, ST)组、EE+ST组和庆大霉素(gentamycin, GM)+ST组,每组10只。对照组、EE组分别以PBS和EE 这个 (10mg)连续灌胃17天,研究EE对正常小鼠机体免疫功能的影响;ST组、EE+ST组和GM+ST组分别以PBS、EE (10mg)和PBS连续灌胃17天,并于第15天再灌胃5×10~8CFU ST感染小鼠,研究EE对小鼠机体抗沙门氏菌感染能力的影响。结果如下:
EE对正常小鼠机体免疫功能的影响:(1)EE对正常小鼠生长和肠粘膜结构无显著影响,说明其对小鼠机体具有良好的安全性;(2)EE可显著提高小鼠机体免疫功能,提高其脾脏指数;(3)EE可在一定程度上可增强小鼠机体的抗体分泌功能,增加小肠分泌型IgA (secretory IgA, sIgA)分泌,但对IgG分泌没有影响;(4)EE可增强小鼠机体的非特异性免疫功能,显著上调小鼠血液、回肠、结肠、脾脏、肠系膜淋巴结(mesenteric lymph node, MLN)和肝脏中促炎细胞因子白介素(interleukin, IL)-6、IL-12、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor, TNF)-α、干扰素(interferon, IFN)-γ和抑炎细胞因子IL-10的表达并显著增加其回肠和结肠的NO产生。 Proteasomal 抑制剂s EE对小鼠机体抗沙门氏菌感染能力的影响:(1)EE可缓解ST感染对小鼠机体和免疫系统的损伤,消除鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella enterica serovar Typhimurium, ST)感染引起的小鼠体重下降,大幅减轻ST感染引起的肠粘膜损伤以及脾脏肿大和CD4+/CD8+值下降;(2)EE可降低肠粘膜的ST感染程度,显著减少回肠和结肠粘膜的中性粒细胞浸润以及ST在结肠的定植和ST向肝脏和脾脏中的移位;(3)EE可增强ST感染小鼠机体的抗体分泌功能,显著促进IgG和sIgA分泌;(4)EE可增强ST感染小鼠机体的非特异性免疫功能,显著上调血液、脾脏、MLN和肝脏中促炎细胞因子IL-6、IL-12、TNF-α、IFN-y和抑炎细胞因子1L-10的表达并显著增加其回肠和结肠的NO产生。 以上结果提示,EE能够通过增强小鼠的机体免疫功能,提高其抗感染能力。 (二)EE对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响 本研究分别以200μg/mL和100μg/mL EE处理RAW264.7小鼠巨噬细胞系和骨髓源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage, BMDM),研究EE对两者免疫功能的影响。结果如下: EE对RAW264.7小鼠巨噬细胞系免疫功能的影响:(1)EE对RAW264.7细胞的安全浓度为0-200μg/mL;(2) EE可激活RAW264.7细胞,显著提高酸性磷酸酶(acid phosphatase, ACP)和乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase, LDH)活性;(3)EE可增强RAW264.7细胞的吞噬功能;(4)EE可增加RAW264.7细胞的细胞因子分泌,显著上调促炎因子IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α、IFN-γ抗炎因子IL-10、转化生长因子(transforming growth factor, TGF)-β1和抗病毒细胞因子IFN-p的基因表达和分泌;(5)EE可增强RAW264.