049,P＜0.01),内皮细胞的通透系数Pa由191.32±4.28%分别降至114.52±2.23%和120.53±1.72%,与单纯AGE-HSA组相比差异有统计学意义(P＜0.01),但细胞的通透性并没有降至正常,且与对照组相比差异仍具有统计学意义(P＜0.01)。 那个 (4)用重组腺病毒改变RhoA活性对HMVECs单层通透性的影响 在细胞转染重组腺病毒试验组中,与对照组相比,50μg/ml的AGE-HSA作用8 h可以显著增加单层HMVECs的通透性(209.01±3.34%),差异有统计学意义(P＜0.01)。细胞转染活性重组腺病毒RhoA

L63后,细胞的通透性也显著增加(187.69±5.83%),差异有统计学意义(P＜0.01)。而细胞转染无活性重组腺病毒RhoA N19,对通透性(96.25±1.81%)没有显著影响(P＞0.05);细胞先转染无活性重组腺病毒RhoA N19后,再与50μg/ml的AGE-HSA作用8 h,与AGE-HSA作用组(209.01±3.34%)相比内皮细胞通透性(92.90±1.65%)显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01)。 3.AGE-HSA刺激对HMVECs中RhoA、ROCK蛋白表达和磷酸化水平的影响 (1) AGE-HSA引起HMVECs内RhoA、ROCK磷酸化水平的改变 ①AGE-HSA以时间和剂量依赖的方式引起HMVECs内RhoA磷酸化水平的增多 AGE-HSA刺激引起RhoA磷酸化水平显著增加,且呈时间(F=2.633,P=0.019)和剂量(F=26.234,P＜0.01)依赖性,但对RhoA本身的表达没有显著影响(P＞0.05)。在时间效应组中,随着AGE-HSA作用时间的延长,细胞中RhoA的磷酸化水平逐渐增多,与对照组相比,从45 min分钟起差异有统计学意义(P＜0.01),至60 min时,到达峰值,随后RhoA磷酸化水平开始缓慢下降,当AGE-HSA作用90 min时与对照组相比差异仍有统计学意义(P＜0.05),随着时间延长,RhoA磷酸化水平继续降低,当达到120 min时,与对照组相比虽然没有显著性差异(P＞0.05),但RhoA磷酸化水平的绝对值仍然比对照组高。剂量效应组中,随着AGE-HSA浓度的增加,细胞中RhoA的磷酸化水平逐渐增多,当AGE-HSA浓度达到25μg/ml时,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05),随着AGE-HSA浓度增加,细胞中RhoA磷酸化水平持续增加,当达到50μg/ml时,细胞中RhoA的磷酸化水平达到峰值,并维持在这一水平,而AGE-HSA对RhoA的表达水平则没有明显的影响(P＞0.05)。

Birinapant ②AGE-HSA以时间和剂量依赖的方式引起HMVECs内ROCK磷酸化水平的增多

AGE-HSA以时间(F=3.247,P=0.044)和剂量(F=17.549,P＜0.01)依赖的方式引起ROCK磷酸化水平显著增加,而AGE-HSA对ROCK的表达水平没有明显的影响(P＞0.05)。时间效应组中,随着AGE-HSA作用时间的延长,内皮细胞中ROCK的磷酸化水平逐渐增加,与对照组相比,45 min分钟起差异有统计学意义(P＜0.05),至60 min时,ROCK磷酸化水平达到峰值(P＜0.01),然后开始缓慢下降,但与对照组相比差异仍有统计学意义(P＜0.01)。在剂量效应组中,随着AGE-HSA浓度的增加,细胞中ROCK的磷酸化水平逐渐增多,当AGE-HSA浓度达到12.5μg/ml时,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05),随着AGE-HSA浓度的增加,细胞中ROCK的磷酸化水平持续缓慢上升。 (2)活性或无活性RhoA重组腺病毒对HMVECs内RhoA、ROCK及其磷酸化水平的影响 对照组中,RhoA及ROCK均有少量磷酸化,转染活性的重组腺病毒RhoAL63后,RhoA、ROCK的磷酸化水平明显升高,而RhoA、ROCK本身则没有明显变化,单独转染无活性的重组腺病毒RhoA mTOR抑制剂 N19,内皮细胞内RhoA、ROCK及其磷酸化水平均没有明显改变,而先转染无活性的重组腺病毒RhoA N19,然后再和AGE-HSA作用,则明显抑制了AGE-HSA引起的RhoA、ROCK磷酸化水平的增多。 4.AGE-HSA引起的内皮细胞反应中RhoA、ROCK活性变化与p38 MAPK通路的关系 ROCK特异性抑制剂Y-27632或H-1152均能够显著降低AGE-HSA引起的p38MAPK磷酸化水平的增加;同时p38MAPK特异性抑制剂SB203580也能够显著降低AGE-HSA引起的RhoA、Rho激酶磷酸化水平的增加。 结论: 1.AGE-HSA以时间和剂量依赖的方式引起HMVECs形态和功能的改变。 2.RhoA/ROCK信号通路参与了AGE-HSA介导的HMVECs形态和功能的改变,但并不是唯一的通路。 3.AGE-HSA通过介导RhoA、ROCK的磷酸化而引起HMVECs形态和功能上的改变。 4.

猪诱导多能性干细胞的转录组分析 对LFB2i-piPSCs进行了mRNA和sRNA测序，并且和PEF、FGF2-piPSCs（能够产生嵌合体动物的piPSCs）数据进行了比较。mRNA-seq结果显示LFB2i-piPSCs表达高水平的SOX2,

L-MYC, ESRRB等基因以及相对低水平的POU5F1(OCT4), KLF4和NANOG基因。miRNAs分析表明LFB2i-piPSCs高表达与多能性相关的miR-17-92、miR-302b-367、miR-106a-363、miR-290家族中的miRNAs，低表达let-7家族中的miRNAs。 4.山羊NANOG启动子报告载体的构建和细胞多能性监控 INK1197 花费 首先尝试用不同的培养条件进行了山羊ES样细胞的分离和iPS样细胞的诱导，并对获得的细胞进行了初步鉴定。之后克隆并验证了山羊NANOG近端启动子，将其与EGFP相连接构建了报告载体。通过细胞转染和显微注射证明该报告载体具备表达功能和组织特异性。将该载体稳定转染到山羊成纤维细胞中作为重编程的受体细胞，从而对山羊体细胞重编程过程进行监控。同时将该报告载体显微注射到山羊胚胎中用于监控山羊早期胚胎的发育进程。
胚胎干细胞（Embryonic stem cells, ESCs）主要来源于胚胎囊胚期的内细胞团，具有分化的多潜能性和自我更新能力。转录因子调控网络和表观修饰调节，包括microRNA（miRNA）调控，在ESC的多能性维持和分化调节中都发挥着重要的作用。2010年，研究发现维生素C能促进诱导干细胞（induced pluripotent stem cells, Sunitinib iPSC）产生，此后维生素C在诱导细胞重编程和ESCs调控领域的研究引起了广泛关注。研究表明，维生素C有利于促进ESCs多能性维持，改善iPSC的诱导效率以及提高iPSC的重编程质量。目前研究表明，维生素C主要调控干细胞的表观修饰，包括DNA甲基化和组蛋白修饰等。 本研究以小鼠胚胎干细胞J1（J1mESCs）和小鼠畸胎瘤细胞系F9为研究对象，结合转录组表达谱芯片分析、miRNA测序分析以及实验验证等方法，探索维生素C调控干细胞多能性维持的作用机理。 1.维生素C促进无饲养层J1mESCs的自我更新和克隆形态。在无LIF的干细胞培养液中培养J1mESCs，加入维生素C后，J1mESCs的克隆形态变大，碱性磷酸酶（alkalinephosphatase, AP）活性升高。而维甲酸（retinoic acid, RA）诱导分化后，J1mESCs克隆形态明显变小，周围出现大量分化细胞，AP活性也显著降低。重新加入维生素C后，干细胞克隆形态明显恢复，AP活性也恢复较高水平。表明维生素C有助于促进干细胞的自我更新，并能够拮抗RA诱导的干细胞分化。 2.维生素C能够促进小鼠J1mESCs多能性基因的表达，并下调一些与分化相关的细胞信号转导途径。 a）基因表达谱芯片证实维生素C有利于小鼠J1mESCs多能性基因表达。收集维生素C处理的J1mESCs，进行基因表达谱芯片分析，以寻找维生素C的下游调控基因。利用在线软件DAVID（Database

for Annotation, Visualization and Integrated Discovery）对实验数据进行GO（Gene Ontology）和KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes andGenomes）分析，结果发现，维生素C广泛促进多能性基因的表达，其中包括Esrrb、Utf1、Klf4、Tcl1、Eras、Nanog等重要的多能性因子，同时下调分化相关转录因子的表达。上述结果得到实时定量PCR（qPCR）的验证。

b）维生素C激活核心多能性基因转录。分别构建小鼠Nanog、Oct4、Sox2、Klf4基因近端启动子萤光素酶报告载体，检测维生素C处理对这些启动子活性的影响。结果发现，维生素C能促进Nanog和Oct4近端启动子活性上升。同时qPCR和Western Blot验证表明，维生素C能够促进Nanog基因表达上升。 c）维生素C下调部分与细胞分化相关的信号转导途径。采用信号通路报告载体转染J1mESCs和小鼠F9细胞，加入维生素C后检测信号通路效应元件的变化。结果发现，维生素C下调NF-κB、JNK、Myc等与细胞凋亡、分裂、周期调控相关的细胞信号转导途径。 3.维生素C促进mESC中特异性miRNA的表达，并通过miRNA介导的基因表达调控，抑制与细胞分化和发育相关基因。 a） miRNA深度测序结果表明维生素C能促进mESC中特异性miRNAs的表达。收集维生素C处理的J1mESCs，在Illumina HiSeq2000平台上进行小RNA深度测序分析。结果发现，维生素C促进干细胞中miRNA整体表达水平，发生显著变化的miRNAs中，超过70%被上调，尤其是干细胞特异性miRNA簇，包括miR-290–295、miR-17–92、miR-106b–25等，许多Dlk1-Dio3印记区编码的miRNAs也能被维生素C显著上调，包括miR-143、miR-434、miR-540、miR-433等，而与分化相关的miRNAs表达则下调，如miR-470。上述结果得到miRNA 所以 qPCR的验证。 b）筛选上述实验中维生素C上调的miRNAs，利用在线软件TargetScan预测靶标，并进行GO分析，发现这些靶标主要富集于调控细胞分化与发育相关途径。筛选miR-296,miR-361, miR-143, miR-331, miR-434部分靶标，利用双萤光素酶报告检测miRNA对靶标抑制作用以及qPCR验证靶标mRNA表达水平。结果表明，预测到的11条靶标序列，其中有9条能被相应的miRNAs抑制，同时，qPCR检测的4个靶基因mRNA水平，其中3个靶基因表达显著下调。说明预测具有较高的准确性，预测结果可以反映出miRNA的调控作用。 c）维生素C上调miR-296, miR-361, miR-143, miR-331, miR-434的表达，维生素C下调Kdm6b、Sox6、Klf13、Sox17等与调控发育相关基因，同时，这些上调的miRNA靶向抑制这些下调的基因。上述结果表明，维生素C通过介导miRNA表达抑制干细胞中与分化和发育相关的基因。 4.

The activity of Nodal signaling can be modulated by microRNAs(miRNAs)as previously reported,but 寻找更多 little is known about which miRNAs are regulated by Nodal during gastrulation.In the present study,we found that the expression of mir206,one of the most abundant miRNAs during

zebrafish early embryo development,is regulated by Nodal signaling.Abrogation of Nodal signal activity results in defective convergence and extension(CE)movements,and these cell migration defects can be rescued by supplying an excess of mir206,suggesting that mir206 acts downstream of Nodal signaling to regulate CE movements.Furthermore,in mir206 morphants,the expression of cell adhesion molecule E-cadherin is significantly increased,while the key transcriptional repressor of E-cadherin,snail1a,is depressed.Our study uncovers a novel mechanism by which Nodal-regulated mir206 modulates gastrulation movements in connection with the Snail/E-cadherin pathway.
青光眼是一组以视神经萎缩和视野缺损为共同特征的疾病,病理性眼压增高是主要危险因素。转化生长因子-β(transforming growth factor beta,TGF-β)是一类生物学功能复杂的细胞因子,与很多眼科疾病密切相关。Smad蛋白家族是TGF-β细胞内信号转导的重要因子。本文就TGF-β/Smad信号通路对青光眼产生的机制及术后手术区瘢痕形成的影响进行综述。
Mounting

evidence in stem cell biology 获悉更多 has shown that microRNAs(miRNAs) play a crucial role in cell fate specification, including

stem cell self-renewal, lineagespecific differentiation, and somatic cell reprogramming.These functions are tightly regulated by specific gene expression patterns that involve miRNAs and transcription factors. To maintain stem cell pluripotency, specific miRNAs suppress transcription factors BIBF 1120小白鼠 that promote differentiation, whereas to initiate differentiation, lineagespecific miRNAs are upregulated via the inhibition of transcription factors that promote self-renewal. Small molecules can be used in a similar manner as natural miRNAs, and a number of natural and synthetic small molecules have been isolated and developed to regulate stem cell fate. Using miRNAs as novel regulators of stem cell fate will provide insight into stem cell biology and aid in understanding the molecular mechanisms and crosstalk between miRNAs and stem cells.Ultimately, advances in the regulation of stem cell fate will contribute to the development of effective medical therapies for tissue repair and regeneration. This review summarizes the current insights into stem cell fate determination by miRNAs with a focus on stem cell self-renewal, differentiation, and reprogramming. Small molecules that control stem cell fate are also highlighted.

Conclusions IL-1β promotes GH secretion and synthesis in rat MtT/S somatotroph cells. The stimulatory effect of IL-1β on hGH gene

promoter appears to require the activation of MEK, p38 MAPK, PI3-K, and a fragment of promoter sequence that spans the –196 to –132 bp of the gene, but it may be unlinked with Pit-1 protein.
本研究观察丝裂原活化蛋白激酶对全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化的影响并探讨其机制。采用MTT法测定细胞增殖活性,用流式细胞术分析细胞周期,NBT还原实验检测粒系分化,底物磷酸化法测定细胞外调节激酶(ERK)活性。结果显示:0.01-0.1μmol/L的ATRA呈时间和剂量依赖方式抑制NB4细胞增殖,并诱导NB4细胞向粒系分化;在这过程中ATRA激活ERK活性,ERK抑制剂PD98059能部分阻断ATRA的作用。p38MAPK的特异抑制剂SB203580与ATRA联合应用部分阻断了ATRA对细胞的生长抑制和诱导分化作用。结论:ATRA在诱导NB4细胞分化过程中激活ERK和P38MAPK途径,并且对该途径有依赖作用。
目的:探讨P38MAPK抑制剂对急性水肿型胰腺炎的疗效及其机制。方法:雨蛙素建立小鼠水肿型胰腺炎模型,分成对照组、造模组和SB203580治疗组,分别测定血清淀粉酶、血清TNF-α和IL-6,并作胰腺病理评分。结果:SB203580组水肿型胰腺炎的病理病变减轻,血清淀粉酶水平下降,但血清TNF-α与IL-6水平无变化。结论:抑制P38MAPK传导途径能减轻水肿型胰腺炎,但与TNF-α、IL-6无明显关系。
目的研究结核分枝杆菌早期分泌抗原CFP-10-ES-AT-6复合物(CE复合物)对人单核-巨噬细胞功能表型的影响及其作用的细胞信号传导通路。方法分别采用ELISA法以及流式细胞仪检测大肠杆菌克隆表达纯化的CE复合物在不同时间及浓度对人单核-巨噬细胞TNFα-产生对细胞表型的影响,并且应用各种细胞信号传导通路抑制剂来探讨CE复合物作用的细胞信号传导通路。结果结核分枝杆菌CE复合物能够在早期(6~8h)诱导人单核-巨噬细胞活化,大量产生TNFα-,但在晚期(>48 时间 Cilengitide 价格 h),则没有此作用;细胞信号传导通路MEK1/2和p38MAPK的选择性抑制剂SB203580、PD98059、U0126能抑制CE的这种作用;CE复合物在早期(18 h)促进单核-巨噬细胞表面抗原提呈功能分子CD80、CD40的表达。结论CE复合物在感染早期可能通过激活MEK1/2和p38MAPK刺激单核巨噬细胞活化,但在晚期则没有此作用。在感染早期可能具有重要的抗结核保护作用。
p38MAPKs是一个激酶家族,负责调节包括细胞迁移、增生和分化在内的多种细胞功能。本文主要介绍p38对少突胶质细胞分化的调节作用。采用PD169316和SB203580抑制p38后,不同分化阶段少突胶质细胞特异性标志物的蛋白和mRNA的聚集减少,包括髓鞘碱性蛋白、髓鞘相关糖蛋白、鞘糖脂、半乳糖酰基鞘氨醇和硫脂。同时,细胞周期调节因子p27kip1和转录因子Sox10的表达也有显著的下降。最为重要的是,p38抑制剂能够通过少突胶质细胞完全和不可逆地阻断背根神经节神经元的髓鞘形成,并阻止轴-胶粘附分子Caspr的轴膜组装。本实验结果提示p38

http://www.selleckchem.cn/products/dabrafenib-gsk2118436.html MAPKs在OLGs成熟和启动髓鞘形成的关键调控步骤中扮演了重要角色。
Objective To investigate the effect of interleukin-6(IL-6)on the human growth hormone(hGH)gene expression in a rat somatotropic pituitary cell line MtT/S.Methods The plasmids containing various lengths of hGH gene 5′-promoter fragments were constructed.Stably transfected MtT/S cells were created by cotransfecting the above plasmids and pcDNA3.1(+)with DMRIE-C transfection reagent.After the administration of these cells with IL-6 and/or various inhibitors of signaling transduction pathways,the luciferase activities in MtT/S cells lysis were assayed to demonstrate the effects of IL-6 on hGH gene promoter activity and possibly involved mechanism.Results The 103 U/mL IL-6 stimulated GH secretion and synthesis,and promoted the 5′-promoter activity of GH gene in stably transfected MtT/SGL cells with the action of 1.69 times above the control.Among inhibitors of signaling transduction pathways,mitogen-activated protein kinase kinase(MAPKK/MEK)inhibitor PD98059(40 μmol/L)and p38 mitogen-activated protein kinase(MAPK)inhibitor SB203580(5 μmol/L)completely blocked the stimulatory effect of IL-6.Western blot analysis further confirmed the activation of phosphorylated MEK and p38 MAPK in MtT/SGL cells.Neither over-expression of Pit-1 nor inhibition of Pit-1 expression affected IL-6 induction of hGH promoter activity.

3%和35.8%下降到对照组水平。此外,PD98059同时抑制了Bortezomib引起的JNK p46的活化,但SP600125对MEK活性无影响。当给与p38特异性抑制剂SB203580时,Bortezomib诱导的CD14和CD11B的表达率为42.6%和56.0%,提示了p38可能对Bortezomib诱导的AML细胞的分化起到负调控作用。以上结果证明了MEK/ERK-JNK通路参与介导Bortezomib诱导的AML细胞分化。 购买PLX3397 Western blotting检测结果表明,Bortezomib诱导AML细胞分化过程中转录因子STAT1的蛋白水平与活性形式pSTAT1

Tyr 701均呈时间依赖性上调。Realtime PCR检测结果表明STAT1 mRNA的表达也呈时间依赖性增加。给与CHX抑制STAT1 mRNA的表达,Bortezomib作用后,STAT1蛋白水平仍有所上调,提示Bortezomib同时抑制了STAT1蛋白的降解。此外我们也观察到STAT1下游基因C/EBPα蛋白的上调。慢病毒介导的shRNA-STAT1显著下调了HL60细胞中的STAT1蛋白水平,Bortezomib作用于shRNA空载转染的HL60细胞72小时后,CD14和CD11B的表达率分别为20.4%和39.6%,而在shRNA-STAT1转染的细胞中,Bortezomib诱导的CD14和CD11b仅为10.1%和19.6%。给与PD98059或SP600125抑制Bortezomib引起的HL60细胞分化的同时,观察到STAT1水平上调被抑制,活性水平被抑制,C/EBPa表达也受到抑制。上述结果表明Bortezomib激活的MEK/ERK-JNK通路可能通过进一步激活分化相关转录因子STAT1诱导AML细胞的分化。 RAD001供应商 3) Bortezomib诱导的AML细胞分化与凋亡为RARα非依赖的过程。 Western blotting结果显示,Bortezomib作用于HL60后,维甲酸受体RARa蛋白水平增加,但通过双荧光素酶检测系统检测结果显示,RARa转录活性无显著变化。同时流式细胞术检测结果表明Bortezomib能诱导RARa突变的HL60R细胞分化抗原CD11b的表达及凋亡的发生。以上结果提示Bortezomib诱导AML细胞的分化与凋亡是RARα非依赖的过程。

4) Bortezomib诱导AML细胞分化的同时,伴随着AML细胞的凋亡,并初步探讨Bortezomib引起的AML细胞分化与凋亡之间的关系。 Annexin V/PI双染流式细胞术检测结果显示,5 不 nM Bortezomib在诱导白血病细胞分化的同时,伴随了时间依赖性的细胞凋亡。但由MEK/ERK-JNK通路的抑制引起的Bortezomib细胞分化的抑制过程中,Bortezomib引起的细胞凋亡率无显著性变化。由此推测,Bortezomib诱导的AML细胞的分化与凋亡可能是两个相对独立的过程。 第二部分：Bortezomib通过抑制ATRA引起的RARa蛋白的降解,协同ATRA诱导AML细胞粒性分化。

1) Bortezomib协同ATRA诱导AML细胞粒性分化。 MTT检测法显示Bortezomib与ATRA联合作用能协同抑制HL60与NB4细胞的增殖。通过台盼蓝拒染法与血细胞计数板法,计数并绘制Bortezomib与ATRA联合作用后的细胞的增殖曲线和存活率曲线。结果显示Bortezomib(在HL60细胞上选用浓度2.5 nM,在NB4细胞上选用浓度2.5、5 nM)单药作用不影响细胞的存活率和细胞增殖能力,但能显著增强ATRA引起的细胞增殖抑制作用,而这种作用并不是通过诱导细胞死亡实现的。我们从形态学、生化指标及分子标志三方面指标证实了Bortezomib能促进ATRA诱导的HL60、NB4细胞的分化,具体表现为与ATRA单用组相比,药物联用组引起的核分叶比例显著增加,NBT还原能力显著增强,分化抗原CDllb表达量显著增加。 在人原代白血病细胞上,ATRA与Bortezomib也具有协同作用。在M3-AML型、AML/ALL混合型、AML-resistance型三个原代病人骨髓中分离得到原代白血病。通过细胞计数或CCK8检测,结果显示两药联合作用后细胞存活率显著低于单用组。在M3-AML型原代病人样本上,Bortezomib增强了ATRA引起的细胞NBT还原能力。 2) Bortezomib联合ATRA通过诱导HL60细胞分化,抑制裸小鼠HL60移植瘤的生长。 裸小鼠HL60人白血病细胞移植瘤实验结果显示,ATRA (5 mg/kg)组及Bortezomib (0.1 mg/kg)组均表现出一定的抗肿瘤作用,其T/C%值分别为58.0%和62.0%,抑瘤率分别为40.0%和20.0%,联合作用组T/C%值和抑瘤率分别为45%和58.9%,说明Bortezomib与ATRA在体内也有较好抗肿瘤协同作用。通过分离得到瘤组织单细胞悬液,通过流式细胞术检测,显示联用组瘤组织中分化抗原CD11b的表达率为53.1%,显著高于ATRA单用组(40.4%)和Bortezomib单用组(38.

15。两种药物均可诱导4种细胞凋亡,两药联用可使BT-474、SK-BR-3和MDA-MB-231细胞凋亡率显著增加,P<0.01。实时荧光定量PCR与蛋白质印迹法检测结果发现,单独用药能上调Bax及下调Bcl-2基因表达水平,并下调p-Akt蛋白表达水平,其中BT-474、SK-BR-3和MDA-MB-231细胞的联合用药组效果更显著,P
胃癌是全球第三大致死率的恶性肿瘤,在确诊时往往处于疾病中晚期阶段。目前许多研究均提示胃癌患者体细胞基因组存在异常。然而,尽管目前胃癌基因组学特性方面取得很多进展,但病人预后并无明显改善。对于进展期/晚期胃癌(advanced

Buparlisib半抑制浓度 gastric cancer,AGC)患者,中位生存时间仅维持在12个月左右。曲妥珠单抗、雷莫芦单抗(ramucirumab)、阿帕替尼(apatinib)等的出现显示出胃癌分子靶向治疗的希望及针对肿瘤分子生物靶向治疗的重要性。本文就目前AGC分子靶向治疗的研究现状简要综述。
膜结合蛋白SH3GL1参与调控某些肿瘤细胞生物学行为,而其对紫杉醇耐药乳腺癌细胞的恶性生物学行为影响尚未见报道.为阐明SH3GL1对紫杉醇耐药敏感性的影响以及潜在的分子机制,本研究首先采用免疫组化法证实SH3GL1在紫杉醇耐药乳腺癌组织高表达(P<0.05);同时抑制SH3GL1表达(P<0.05),耐药基因MDR1表达降低(P<0.05),p-AKT和p-gp水平下降(P<0.05).上述结果表明,降低SH3GL1表达可以减弱紫杉醇耐药性,增加乳腺癌对紫杉醇的敏感性,这为临床上紫杉醇耐药乳腺癌患者的治疗提供了新的靶点.
Colon cancers develop adaptive mechanisms to survive under extreme conditions and 也许 display hallmarks ofunlimited proliferation and resistance to cell death. The deregulation of cell death is a key factor that contri-butes to chemoresistance in tumors. In a physiological context, balance between cell proliferation and death, and protection against cell damage are fundamental processes for maintaining gut epithelial homeostasis. The

mechanisms underlying anti-death cytoprotection and tumor resistance often bear common pathways, and although distinguishing them would be a challenge, it would also provide an opportunity to develop

advanced anti-cancer therapeutics. This review will outline cell death pathways(i.e., apoptosis, necrosis, and necroptosis), and discuss cytoprotective strategies in normal intestinal epithelium and death resistance mechanisms of colon tumor. In colorectal cancers, the intracellular mechanisms of death resistance include the direct alteration of apoptotic and necroptotic machinery and the upstream events modulating death effectors such as tumor suppressor gene inactivation and pro-survival signaling pathways. The autocrine, paracrine and exogenous factors 不 within a tumor microenvironment can also instigate resistance against apoptotic and necroptotic cell death in colon cancers through changes in receptor signaling or transporter uptake. The roles of cyclooxygenase-2/prostaglandin E2, growth factors, glucose, and bacterial lipopolysaccharides in colorectal cancer will be highlighted. Targeting anti-death pathways in the colon cancer tissue might be a promising approach outside of anti-proliferation and anti-angiogenesis strategies for developing novel drugs to treat refractory tumors.

不同剂量芥子气所致小鼠染毒耳郭皮肤损伤模型的建立 芥子气所致皮肤损伤的严重程度与染毒剂量有关，染毒剂量越高，皮肤肿胀越明显。本研究采用文献中常用的32mg/mL芥子气5μL（低剂量）和在溶剂中达最大溶解度，即128mg/mL，5μL（高剂量）两个染毒剂量建立了不同损伤程度的芥子气小鼠耳郭染毒皮肤损伤模型，肿胀率分别为154.7%和204.8%。 2.甾体类抗炎药地塞米松对芥子气耳郭染毒小鼠皮肤损伤的影响 染毒前30min灌胃给予甾体类抗炎药物地塞米松（5mg/kg）对芥子气染毒小鼠耳郭肿胀无影响。 3.非甾体类抗炎药吲哚美辛抗芥子气损伤的药效评价 染毒前30min灌胃给予非甾体类抗炎药吲哚美辛（10mg/kg）对高、低剂量芥子气染毒小鼠耳郭肿胀均有显著地抑制作用，肿胀抑制率分别是40.0%和25.7%。

二、新型具有抗炎活性药物抗芥子气损伤的药效评价 芥子气致伤机制复杂，涉及多种炎性反应环节，因此本研究还进一步针对芥子气致炎的其它环节开展了研究。 1.辣椒素受体激动剂抗芥子气损伤作用评价 辣椒素受体激动剂可通过耗竭P物质抑制炎症反应，代表药物为奥伐尼。临床上用于减轻神经性炎症以及镇痛止痒等。目前仅有少量文献报道，其减轻芥子气所致皮肤损伤，但作用特点尚不明确。本研究以非甾体抗炎药吲哚美辛为阳性对照，考察了奥伐尼对染毒皮肤损伤的影响。结果表明，局部涂抹给予奥伐尼（0.125、0.25和0.05mg/耳）对低剂量芥子气染毒小鼠耳郭肿胀均有显著地抑制作用，且强于吲哚美辛，肿胀抑制率分别是68.2%、87.0%和81.6%；奥伐尼对高剂量芥子气染毒小鼠耳郭肿胀无明显影响。 进一步采用伊红-苏木素染色，观察奥伐尼对低剂量芥子气染毒耳郭皮肤病理损伤的影响。结果表明，奥伐尼可显著降低芥子气诱导炎性细胞浸润和表皮细胞坏死，且保护作用强于吲哚美辛。

Afatinib价格 2. p38抑制剂抗芥子气损伤活性筛选与评价 p38激酶居于炎性反应的中央环节，其抑制剂是近年来抗炎免疫药理学研究的热点之一。BIRB796是第一个进入III期临床试验的p38抑制剂。本课题与化学合成实验室合作，获得了50个BIRB796类似物，并对它们的抗芥子气损伤活性进行了筛选和评价。 2.1BIRB796类似物的抗炎活性初筛 采用LPS诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的体外模型，以p38抑制剂SB203580作为阳性对照，观察了50个化合物的抗炎活性。结果表明，化合物p38-98、p38-99、p38-123细胞毒性低，且可显著性抑制LPS诱导TNF-α分泌，IC50分别为10.33μM、48.92μM和19.39μM。 2.1.1p38抑制剂抗芥子气损伤细胞水平药效评价 2.1.1.1p38抑制剂对芥子气染毒HaCaT细胞活力的影响 采用芥子气染毒HaCaT细胞模型，观察了p38抑制剂SB203580、BIRB796以及活性化合物p38-98、p38-99对染毒细胞的保护作用。结果表明，SB203580、BIRB796、p38-98、p38-99在染毒后6h时可显著改善200μM芥子气所致细胞活力的降低。 没有 或者 2.1.1.2p38抑制剂对芥子气染毒HaCaT细胞IL-6和IL-8分泌的影响 采用芥子气染毒HaCaT细胞模型，观察了p38抑制剂SB203580、BIRB796以及活性化合物p38-98、p38-99对染毒细胞炎性介质分泌的影响。结果表明，SB203580、BIRB796、p38-98、p38-99均可显著地抑制炎性细胞因子IL-6和趋化因子IL-8的分泌，并呈良好的剂量依赖关系。在两种p38抑制剂代表化合物中，BIRB796抑制作用强于SB203580。

2.1.2p38抑制剂抗芥子气损伤整体动物水平药效评价 2.1.2.1p38抑制剂对芥子气耳郭染毒小鼠皮肤损伤的影响 染毒前24h、30min以及染毒后12h腹腔注射给予SB203580、BIRB796以及活性化合物p38-98、p38-99（10mg/kg），考察了上述p38抑制剂对染毒皮肤损伤的影响。结果表明，除SB203580外，BIRB796、p38-98、p38-99对耳肿胀均有一定的抑制趋势，抑制率分别是20.5%、17.4%和17.8%。 2.1.2.2p38抑制剂对芥子气全身中毒小鼠存活的影响 采用芥子气40mg/kg（LD99）进行皮下注射染毒建立芥子气全身中毒模型，静脉注射给予p38抑制剂SB203580、BIRB796以及活性化合物p38-98、p38-99（5mg/kg/d），观察小鼠染毒7天内的死亡情况。结果表明，模型组小鼠于染毒第5天全部死亡，药物处理组小鼠分别于染毒第6天和第7天全部死亡，提示p38抑制剂对全身中毒小鼠的存活率无明显影响 2.1.2.3p38抑制剂中活性化合物代谢稳定性研究 采用大鼠肝微粒体模型，对SB203580、BIRB796、p38-98、p38-99进行初步的代谢稳定性分析。结果表明，p38-98在大鼠肝微粒体中孵育60min后原型剩余量达到50%。提示p38-98具有较好的代谢稳定性。 2.1.3SB203580和BIRB796抗芥子气损伤机制研究 从药效评价结果可知，变构型p38抑制剂BIRB796对芥子气炎性损伤的保护作用强于竞争性p38抑制剂SB203580。本研究从对应激活化蛋白激酶（stress-activated proteinkinases，SAPKs）c-Jun氨基末端激酶（c-Jun Nterminal kinase，JNK）与p38活性的影响的角度，对SB203580和BIRB796的抗炎机制进行了考察。 2.1.4芥子气诱导染毒HaCaT细胞p38和JNK激酶活化 首先采用Luminex液相芯片技术，考察了芥子气对HaCaT细胞p38与JNK磷酸化的影响。结果表明，芥子气可迅速诱导p38和JNK激酶磷酸化水平升高，并在染毒后0.5h达到高峰。 2.1.

无内毒素糖基化修饰的白蛋白(脂蛋白)制备与鉴定 1.无内毒素AGE-HSA的制备与鉴定 按文献方法体外制备无内毒素AGE-HSA修饰蛋白。将1.75g/L纯化的HSA分别置于含或不含0.1mol/L D-葡萄糖的0.4M磷酸盐缓冲液中,37℃孵育8周；用pH7.4磷酸盐缓冲液透析以除去葡萄糖。以在同样条件下不含葡萄糖的缓冲液中孵育8周的HSA作为对照,用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌消毒后,制备的样本经荧光分光光度分析法鉴定,4℃无菌保存。所有制备AGE-HSA和未经修饰的HSA经鲎试验法检测内毒素含量均低于0.25EU/ml。 PFTα购买 2.无内毒素AGE-LDL的制备与鉴定 根据文献方法,将购买的LDL(2 mg protein/ml)和0.2M D(+)-glucose,以及抗氧化剂(1mg/ml EDTA和10μM BHT)混合均匀,无菌的氮气条件下,37℃孵育4周。制备出AGE-LDL在4℃,pH7.4无内毒素的PBS中透析24小时,用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌后4℃保存。制备的AGE-LDL与LDL比较(以LDL为标准)。使用trinitrobenzene sulphonic acid assay (TNBS法)检测游离蛋白含量(AGE-LDL

0.72±0.032AU VS. LDL 1.00±0.001AU, P0.05);琼脂糖凝胶电泳迁移率实验(AGE-LDL 1.18±0.32 VS. LDL 1.00±0.000, P>0.05);以上实验表明AGE-LDL制备成功。所有制备AGE-LDL和未经修饰的LDL经鲎试验法检测内毒素含量均低于0.25EU/ml。 二.人肾小管上皮细胞(HK-2细胞系)的培养

人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞系)细胞购自美国ATCC库。细胞复苏后在37℃,5%CO2的条件下,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养细胞,待细胞长至70%-80%时,改用无血清培养基静置细胞16-24小时后用于实验。本研究使用6-10代细胞进行实验。倒置显微镜下观察细胞形态为铺路石样。 三.人肾小管上皮细胞系TLR-4受体的检测和定位 1.流式细胞仪检测肾小管上皮细胞上细胞膜TLR4受体 收集处于对数生长期的HK-2细胞,固定后封闭后,加入兔抗人TLR4一抗过夜,用非免疫羊IgG作阴性对照,FITC荧光标记的兔抗山羊二抗避光孵育,PBS重悬细胞后,流式细胞仪检测。 2.免疫荧光检测肾小管上皮细胞上细胞膜TLR4受体 人近端肾小管细胞上皮(HK-2细胞)培养于置有盖玻片的培养板上,待细胞生长至约70%融合,固定封闭后,加入兔抗人TLR4一抗过夜,用非免疫羊IgG作阴性对照,FITC荧光标记的兔抗山羊二抗避光孵育,碘化丙啶(PI)室温避光孵育染核,缓冲甘油封片。在荧光显微镜下观察、拍片。 四.AGE-LDL等诱导人肾小管上皮细胞表达IL-6和IFN-β 人近端肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入LDL(100μg/ml). HSA(100μg/ml).AGE-LDL(100μg/ml)和AGE-HSA(200μg/ml)刺激6小时,提取mRNA,qRT-PCR检测IL-6和IFN-β。或者刺激12小时,集细胞上清,按试剂盒说明,ELISA法检测IL-6在细胞上清中的浓度。 五.AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞表达IL-6的时间、浓度效应 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入25、50、100μg/mlAGE-LDL或100μg/ml未经修饰的LDL,于0、3、6、12及24小时收集细胞提取总RNA,行qRT-PCR检测IL-6 不 CAL-101 mRNA。或者收集细胞上清,按试剂盒说明,ELISA法检测IL-6在细胞上清中的浓度,并以细胞总蛋白量矫正。 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入或不加入10μg/ml多粘菌素B(PMX-B),孵育2小时候加入100μg/ml AGE-LDL或10gg/ml LPS,6小时后收集细胞提取总RNA,行qRT-PCR检测IL-6 mRNA。 六.TLR4介导AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞表达IL-6 1.TLR4 siRNA干扰后,AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞表达IL-6的变化 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用TLR4 siRNA 100pmol有效干扰后,分别加入LDL(100μg/ml)、AGE-HSA(200μg/ml)和AGE-LDL(100μg/ml),6小时后收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测。 2.TLR4中和抗体阻断后,AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞表达IL-6的变化

人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入5μg/ml.1 Oμg/ml.20μg/ml兔抗人TLR4抗体或20μg/ml同源非免疫的兔IgG抗体,预孵2小时后,分别加入100μg/mlAGE-LDL,6小时后收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测。 3.阻断或中和TLR4受体,可以减少AGE-LDL诱导的HK-2细胞分泌IL-6 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别和TLR4中和抗体20μg/ml预孵2小时或者使用TLR4 SiRNA 100pmol干扰48小时后,加入AGE-LDL 100μg/m1孵育12小时,ELISA检测细胞上清中的IL-6蛋白的水平,并以蛋白浓度校正。 4. AGE-LDL对人肾小管上皮细胞TLR4表达的影响 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入100μg/ml AGE-LDL于0、1、3、6、12及24小时收集细胞。Western-blot检测TLR4蛋白表达情况。 七.AGE-LDL对人肾小管上皮细胞TLR4和下游Myd88/TRIF蛋白的影响 1. AGE-LDL对人肾小管上皮细胞Myd88和TRIF表达的影响 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入100μg/ml AGE-LDL于0、5min、15min、30min、1h、3h及6小时收集细胞。Western-blot检测Myd88和TRIF蛋白表达情况。 2. Myd88/TRIF siRNA干扰后,AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞IL-6 mRNA 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用Myd88/TRIF siRNA 100pmol有效干扰后,分别加入100μg/ml AGE-LDL或10μtg/ml LPS,6小时后收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测。 3.

014 μM)和化合物1-4m (IC50:0.046μM)具有较强的PI3Ka抑制活性,并且对其具有一定的选择性。对化合物1-41进行分子对接,其与蛋白(PDB:3HHM)结合模式与文献报道的Wortmannin与蛋白的结合模式相似(Fig.1)。这一结果证实以香豆素[4,3-c]并吡唑为骨架设计PI3K抑制剂的可行性。Fig.1化合物1-41和Wortmannin分别与蛋白PI3Ka的对接模式在上述实验结果基础上,基于片段药物设计原理,利用计算机辅助药物设计方法,通过Discovery CB-839研究购买 Studio软件将上述活性化合物与PI3Ka蛋白活性位点进行了对接,利用对接得到的分子与蛋白的结合方式,及蛋白活性位点结构特征及空间大小及氮取代基的性质,进一步设计并合成了一系列含有哌嗪以及磺酰基片段的香豆素[4,3-c]并吡唑衍生物,一共分为三个系列共69个化合物。体外细胞抗肿瘤活性测试的结果表明,大部分化合物显示出了优于阳性对照药的抗肿瘤细胞增殖活性。部分化合物表现出很好的对PI3Ka的抑制活性。构效关系及分子对接结果表明：香豆素[4,3-c]并吡唑环氮上取代基的空间位阻及疏水性的大小程度影响了化合物的活性大小,取代基的空间位阻越大,疏水性越好,化合物的活性越好；无论是含哌嗪等氮杂环的化合物还是含磺酰基哌嗪的化合物,取代基上含芳香结构的化合物活性要比含烷基结构的活性要好,当芳香环上的取代基的位阻越大时,化合物的活性越好,而且对PI3Ka具有明显的选择性,如化合物2-4o(ICso:0.021μM),3-4p

(IC50:0.012 pM),4-7m (IC50:0.009μM),以上结果表明这些化合物是有潜力的PI3Ka抑制剂。此外,我们根据上述结论,在吡唑环上用乙酰基链接一些疏水性和空间位阻比较大的苯基哌嗪,二苯甲基哌嗪和吗啉,哌啶等氮杂环的化合物,一共设计了19个香豆素[4,3-c]并吡唑衍生物。体外抗肿瘤活性测试结果表明,乙酰基上链接二苯甲基哌嗪等位阻较大的基团时,化合物也具有明显的抗细胞增殖活性,同时表现出强的PI3Ka抑制活性,如化合物5-7p

以及 (ICso:0.074μM)和5-7q(IC50：0.016μM)。该研究为香豆素[4,3-c]并吡唑类PI3K抑制剂的研发提供了新的思路。
背景:皮肤中KC的凋亡异常与许多皮肤病如银屑病、扁平苔藓、湿疹、白癜风、皮肤老化和皮肤癌等密切相关。KC的凋亡易受环境因素的影响,其中中波紫外线(UVB)辐射尤为重要。UVB辐射易导致皮肤日晒伤,而慢性长期的辐射则可以导致皮肤光老化甚至皮肤癌的发生,这一过程中KC凋亡异常是其重要的病理生理基础。近年研究发现UVB体内外都可激活KC的抗凋亡信号分子磷酸肌醇3激酶(PI3K)和Akt。UVB诱导KC凋亡过程中,胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的活化可以保护UVB诱导的凋亡,并且IGF-1R缺失可加快UVB诱导的KC凋亡,证实UVB可以活化IGF-1R、促进抗凋亡的作用。上述研究证实UVB诱导KC凋亡的过程中存在KC的自身抗凋亡作用,但其具体机制仍未明确。 目的:通过建立体外UVB照射HaCaT的模型,检测Akt/mTOR通路中p-EGFR、p-Akt、p-S6、p-S6K、p-4EBP1的水平变化,并且检测该通路活化对HaCaT凋亡的影响,旨在探明UVB对Akt/mTOR通路的影响,以及该通路活化在KC抗凋亡中的作用。阐明UVB诱导KC凋亡和抗凋亡的分子机制,更加全面准确理解UVB对KC作用的机制,为阐明KC凋亡异常密切相关的皮肤病如白癜风、皮肤老化和皮肤癌的分子作用机理,并为这些疾病的预防和治疗提供全新的思路和手段。方法:Western blotting测定Akt/mTOR通路信号分子的动态水平变化,免疫荧光Hoechst

PR 171 33342染色检测细胞凋亡率。 结果:1.UVB可以激活HaCaT细胞Akt/mTOR通路,并在一定范围内(5mJ/cm2～30mJ/cm2)呈剂量依赖性,在一定范围内(5min～30min)呈时间依赖性。2.EGFR抑制剂PD153035预处理显著抑制了UVB诱导的p-EGFR(1068)水平增加,同时也显著抑制了UVB诱导的p-Akt(Ser473、T308)、p-S6 (S235/236)水平增加。3.PI3K抑制剂LY 294002预处理能显著抑制UVB诱导的p-Akt(Ser473)水平增加,同时也能抑制UVB诱导的p-4EBP1(S65)、p-S6(S235/236)、p-S6K(S235/236)水平增加。4.雷帕霉素预处理对p-AKT(Ser473)的水平无影响(P>0.05),但能显著抑制UVB诱导的p-4EBP1(S65)、p-S6(S235/236)、p-S6K(S235/236)水平增加。5.PI3K抑制剂LY 294002和mTOR抑制剂雷帕霉素预处理能增强UVB诱导HaCaT细胞的凋亡作用。 结论:Akt/mTOR通路活化抗UVB诱导的HaCaT细胞凋亡
恶性肿瘤严重威胁着人们的健康,其死亡率目前居于首位,对肿瘤的预防与治疗一直是医药领域研究的重点和难点。 近年来研究表明,从天然产物中发现新药是抗肿瘤药物研发的重要方式。从传统中草药牡荆属植物黄荆子中提取得到的天然产物VBE含有苯基氢化萘的母核结构,并具有较好的抑制肿瘤生长的作用,经初步研究发现该类化合物的抗肿瘤作用与抑制PI3K-Akt-mTOR信号转导通路有关。 由于从天然植物中提取困难,来源有限,且全合成难度大,收率低,于是本课题以从黄荆中提取分离的具有抗肿瘤活性的天然产物VBE-1为先导化合物,对其结构进行改造,设计合成了8个苯基氢化萘类衍生物,完成了目标化合物的结构确证,并采用MTT法和SRB法对这些化合物抗白血病HL-60细胞和肺癌A459细胞活性做了初步筛选,发现化合物Ⅵ对白血病HL-60细胞抑制活性较好。同时对苯基氢化萘类化合物抗肿瘤活性的构效关系进行了初步探讨,芳环上以7位,3’位甲氧基,6位,4’位羟基取代活性最高。 本课题研究为设计开发活性更好的新型苯基氢化萘类抗肿瘤化合物奠定了基础。
VBE-1为中药黄荆子Vitex Negundo L.

5的为下调,FC在0.5到2之间为无显著变化。结果表明,0.5h时有154个基因上调表达,188个基因下调表达；1h时有213个基因上调表达,223个基因下调表达；3h时有531个基因上调表达,665个基因下调表达。3个时间点都上调的基因有75个,都下调的基因有81个。 进一步对差异表达的TCS基因分析发现,SSU05_0427、SSU05_0906、 SSU05_0944、SSU05_1358、SSU05_1595、SSU05_1660和SSU05_1685等7个基因一直上调表达；而SSU05_0883、SSU05_2090,2个基因一直下调表达；SSU05_0430、SSU05_1910和SSU05_2148,3个基因先下调表达后上调表达；SSU05_1094基因先上调表达,然后下调表达。

3.TCS基因缺失突变株对致病性和炎症反应的影响 在SS2与天然免疫细胞猪中性粒细胞的相互作用过程中,双组份调控系统基因呈现不同的表达情况,且在不同时间发挥作用。1094HK/RR、1660HK/RR和1910HK/RR基因分别在免疫反应的早期、中期和后期发挥作用。 以CD-1小鼠为模型,动物实验结果表明,双组份调控系统基因1910HK/RR、1094HK/RR和1660HK/RR缺失后,降低了宿主促炎症因子的表达水平,在12小时宿主炎症反应最为强烈；SS2抵抗PMNs吞噬的能力,以及SS2的致病性明显降低。
心肌重构是一种引起多种心血管疾病发病率和死亡率显著升高的独立危险因素，可引起心力衰竭和恶性心律失常，最终导致死亡。逆转左心室肥大和重构已成为当前抗高血压和治疗慢性心力衰竭的重要目标之一。汇利心康（HLXK）是本实验室针对在心肌重构过程中发挥关键作用的Gq蛋白α亚单位羧基末端，设计制备的一种多肽药物，能通过抑制Gq蛋白信号传导，有效抑制血管紧张素Ⅱ和去甲肾上腺素诱导的离体心肌细胞肥大反应，以及多种不同动物模型的心肌重构。 MK-8776半抑制浓度 Capmatinib分子重量 然而，心肌细胞的信号转导系统是一个十分复杂的网络，由众多的神经体液分子、受体、G蛋白、效应器、第二信使、转录因子等共同组成。其中多个信号分子之间都存在着反馈调节和交互作用，任何一个节点的变化都可能对整个网络系统产生影响，从而精细调控整个细胞的信号转导乃至组织器官功能。HLXK拮抗Gq功能后，不仅会影响Gq蛋白下游信号分子的表达和功能，而且可能对其他通路的信号分子产生影响。因此，研究HLXK对心肌细胞信号转导网络的影响不仅有助于进一步深入理解其抗心肌重构作用机制，而且有助于了解其对心肌功能的整体影响。

方法： 1.动物分组：SHR雄性大鼠18只，随机分为模型组、氯沙坦组和HLXK组(n=6)，分别给予生理盐水（normal saline, NS）2ml/kg（ip, bid)、氯沙坦6mg/kg（ig, qd)和HLXK90μg/kg（ip, bid)，连续8W；并设立WKY大鼠正常对照，给予NS(2ml/kg, ip, bid)，连续8W。 2.实验过程中，密切观察大鼠的一般情况及其死亡情况。末次给药后，称量体重，颈椎脱臼处死，称重法测定大鼠的心脏指数和左心室指数。 3.采用定量PCR芯片技术检测大鼠心肌组织中心肌重构相关通路的信号分子表达情况。 4.结合PCR芯片筛选结果，采用Real-time PCR和Western blot进行验证。 结果： 1．与WKY大鼠相比，SHR出现明显心肌重构；HLXK能明显降低SHR大鼠的心脏指数和左心室指数，改善左心室重构； 2．在SHR心肌重构信号传导网络中，信号转导分子表达明显上调的有Serpine1、Jun、S1pr3、Max、Grm1、Il1r1、Cdkn1a、Crhr1、Chhr2、Ctgf、Edn1、Fgf2、Bcl2l1、AC5和Akt1；表达明显下调的有Bai1、Ccnd1、Gcgr、Nos2(iNOS)、Pik3cg、Ptgdr、Sctr、Tnf和Vcam1。

3．RT-PCR芯片结果显示HLXK能有效抑制Cdkn1a、Ctgf和Edn1基因表达，上调Grm4、Nos2和Tshr基因的表达。 hypoxia-inducible factor pathway 4．HKXK能明显增加SHR α-MHC mRNA的表达，降低CaN mRNA、CDKN1AmRNA和β-MHC mRNA的表达； 5．HKXK能明显增加SHR α-MHC蛋白表达，降低CaN、CDKN1A和β-MHC蛋白表达。 结论： 1．自发性高血压大鼠发生明显心肌重构，其心肌细胞信号转导网络明显紊乱，数条信号通路的多种神经体液因子、生长因子、受体、效应酶，细胞周期调节蛋白、癌基因和肥大相关基因表达失衡。 2.多肽药物汇利心康能明显改善SHR心肌重构。 3．汇利心康抑制心肌重构作用与其下调CDKN1A、CTGF、ET-1、CaN表达，上调GRM4、NOS2和TSHR表达，纠正α-MHC和β-MHC的表达失衡有关。
目的体外培养骨骼肌L6细胞，诱导其分化成熟，采用棕榈酸诱导的方法，建立骨骼肌L6细胞胰岛素抵抗（IR）模型。给予不同条件的人工干预，探讨骨骼肌源性脂联素对胰岛素抵抗模型中GLUT4表达的影响，及其中p38MAPK信号通路的地位和作用。 方法（1）体外培养大鼠L6成肌细胞并诱导分化为成熟骨骼肌L6细胞，给予不同浓度（0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mmol/L）的棕榈酸（PA），并应用葡萄糖氧化酶法分别测定不同时间（2、4、8、12、24、36h）细胞培养上清液葡萄糖浓度，观察不同浓度PA对L6细胞摄取葡萄糖的影响，据此判断胰岛素抵抗模型建立成功与否。（2）根据干预条件的不同，实验分为四组：NC组（对照组，骨骼肌L6细胞组）；NC+SB组(对照+阻滞剂SB203580组)；IR组（胰岛素抵抗模型组）；IR+PIO组(胰岛素抵抗模型+吡格列酮组)。应用Western blot方法分别测定上述四组APN、p-p38MAPK和GLUT4蛋白表达水平。 结果(1)0.4mmol/L的棕榈酸在作用12、24、36h以及0.6，0.8mmol/L棕榈酸作用8、12、24、36h，或1.0mmol/L棕榈酸作用4、8、12、24、36h后，细胞培养上清液中葡萄糖含量，明显高于对照组（P＜0.05）。据此判断胰岛素抵抗模型建立。（2）Western blot结果显示：①与NC组比较，IR组APN和GLUT4蛋白表达减少，差异有统计学意义（P＜0.05），而p-p38MAPK虽减少，但无统计学意义（P＞0.05）；②与NC组比较，NC+SB组p-p38MAPK和GLUT4的蛋白表达减少（P＜0.05），差异有统计学意义，尽管APN蛋白表达水平减少，但无统计学意义（P＞0.05）；③与IR组比较，IR+PIO组其APN、p-p38MAPK和GLUT4蛋白表达增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论1.大鼠L6肌细胞株通过培养并分化成熟后，经过一定浓度和时间的棕榈酸诱导，可以建立大鼠L6肌细胞胰岛素抵抗模型；2.大鼠L6肌细胞可以分泌和表达脂联素，并影响L6肌细胞GLUT4蛋白的表达；3.