降解实验表明AURKA过表达可以延缓E2F1依赖于蛋白酶体的泛素化降解,促进E2F1的累积。随后,我们还发现AURKA的过表达可以诱导microRNA-17-92的表达上调,而这种作用至少部分依赖于E2F1。 为了研究AURKA导致的耐药性问题,我们建立了AURKA稳转食管癌细胞系,发现AURKA高表达可促进抗凋亡活性；利用一种凋亡芯片筛选Selleckchem ABT 263得到了具有抗凋亡效应的基因PAK7,并且发现AURKA通过E2F1诱导PAK7的表达,敲降PAK7可部分逆转AURKA的抗凋亡活性。对PAK7的进一步深入研究发现PAK7在食管癌细胞系和组织标本中高表达,临床参数分析显示PAK7与食管癌的淋巴结转移和肿瘤分期存在正相关关系,并且PAK7高表达可促进食管癌细胞的迁移能selleck合成力,转化NIH3T3细胞,使其在免疫缺陷的裸鼠中形成肿瘤,提示PAK7可能是一个潜在的候选癌基因。 为了更全面地了解AURKA过表达后E2F1的转录调节,我们用ChlP-chip的方法检测了全基因组水平E2F1结合启动子的状况。应用两种不同的分析工具,对E2F1转录调节的动态变化进行分析后发现：在AURKA高表达0或者-24小时期间,E2F1下游靶基因主要富集于EGF等信号通路,而在24-48小时,E2F1下游靶基因主要富集于VEGF、wnt/β-catenin等信号通路,从48小时内整体变化来看,启动子与E2F1结合的基因主要集中于肿瘤发生发展相关的信号通路以及TGF-p通路等,提示AURKA高表达可能通过E2F1对细胞周期进展具有促进作用。 总之,AURKA是一个在肿瘤发生发展中起多重作用的关键癌基因。

论文第五章利用计算模型对menin-MLL相互作用界面的小分子抑制剂进行了虚拟筛选。我们建立了对接及3D-QSAR药效团两类模型,并通过诱饵分子的测试证明这两类模型具有较好的阳性分子筛选能力。因此,我们制定了一个结合对接以及3D-QSAR模型的虚拟筛选策略。经荧光偏振实验实验验证,在筛选出的121个化合物中,发现了5个具有新型骨架结构的menin-M以及LL抑制剂分子。其中,DCZ_M123具有较好的抑制活性,其IC50为4.71±0.12μM,Ki值为0.94±0.03μM。
近10年来，肺癌已经逐渐从“one fits all”的治疗模式过渡到以分子标志为指导的个体化治疗，其中驱动基因为分子标志的靶向治疗有了更为显著的进展。EGFR （Epidermal growthhttp://www.selleckchem.cn/products/at13387.html factor receptor）、 EML4-ALK （Echinodermmicrotubule-associated protein-like4and anplastic lymphoma kinase）、 KRAS（v-Ki-ras2Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog点击此处）是肺腺癌最重要的三个驱动基因。第一个以驱动基因为靶点的成功范例是EGFR TKIs（Tyrosine kinaseinhibitor）治疗EGFR突变患者的有效率达70%，疾病无进展生存期（progression-free survival，PFS）也显著延长，使得肺癌的治疗模式发生了革命性的改变，第二个成功的范例是克唑替尼治疗ALK阳性患者的有效率约60%，2年生存率达50%，也显著优于传统的化疗疗效。

方法:用不同浓度的TCA和/或阿糖胞苷(β-D-Arabinofuranosyl cytosine,AraC)处理AML细胞株HL60或AML初治患者及健康人骨髓单个核细胞( bone marrow mononuclear cell,BMMNC)。CCK-8法测定HL60细胞增殖活性,流式细胞术检测HL60细胞周期变化, Annexin V/PI双标法检测HL60细胞和BMMNC凋亡,CD4BYL719核磁5/CD34/Annexin V三标法检测BMMNC CD34+细胞凋亡。Western blot检测TCA处理后HL60细胞c-myc基因表达。激光共聚焦术检测TCA处理后HL60细胞NF-κB活性。甲基纤维素法检测TCA处理后BMMNC克隆形成。 结果:TCA呈时间和剂量依赖性影响HL60细胞增殖。低浓度(10μM,20μM)TCA作用24 h后,促进HL60细BVD-523分子量胞增殖,和阴性对照组相比,有显著差异(P10%细胞发生凋亡,增加TCA的作用浓度使HL60细胞凋亡率进一步增加。TCA浓度≤60μM时作用24 h后,HL60细胞凋亡率0.05)。高浓度TCA(≥90μM)作用24 h后可诱导>10%细胞发生凋亡,增加TCA浓度和作用时间可诱导更多细胞凋亡。60μM TCA作用24 h使K562细胞明显阻滞于G2 / M期,而30μ很少M TCA则轻微增加G2 /M期细胞的比例(P>0.05)。K562细胞高表达c-Myc蛋白和磷酸化Crkl,TCA呈时间和剂量依赖性明显抑制c-Myc蛋白的表达和Crkl磷酸化水平。TCA呈时间和剂量依赖性下调线粒体跨膜电位和上调K562细胞的Fas表达。TCA呈剂量依赖性抑制K562细胞的Bcr-Abl转录水平。TCA呈剂量依赖性诱导CML BMMNC凋亡,对正常BMMNC的细胞毒作用很小。TCA非谱系特异性抑制CML BMMNC克隆形成。

DCP对肝癌细胞株的增殖有不同程度的刺激作用。SU11274能够抑制或抵消DCP促进HCC细胞生长增殖的生物学作用。SU11274能够降低细胞磷酸化c-Met、磷酸化ERK的水平,从而抑制c-Met信号通路的传导。 结论：c-Met激酶小分子抑制剂SU11274能够显著地抑制HCC细胞生长增殖,并能对抗或抵消DCP促进HCC细胞增殖的作用。抑制c-Met激酶活性DAPT secretase说明书可能是抗HCC药物研究与开发的合理策略,该类抑制剂可能对表达DCP的HCC更有效。 第三章APN/CD13抑制剂抗肿瘤效果及机制研究 第一节.APN/CD13抑制剂抗HCC侵袭及新血管生成研究 目的：探讨APN/CD13抑制剂24F对HCC细胞侵袭和新血管生成的抑制作用 方法：选用人HCC细胞HuH-7和人脐静脉血管内皮细胞HUVEC,Ruxolitinib NMR二者均表达APN/CD13。以L-亮氨酸对硝基苯胺为底物测定24F对APN/CD13酶活性的抑制作用。MTT法测定24F对HuH-7细胞增殖的抑制作用。Transwell细胞侵袭实验测定24F对HuH-7细胞侵袭和游走运动能力的抑制作用。微管形成实验测定24F对HUVEC细胞在Matrigel表面形成微管样结构的抑制作用。 结果：化合物查找更多24F对APN/CD13酶活性的半数抑制浓度为1.88mM。24F在0-200μg/mL浓度范围内对HuH-7细胞的增殖具有轻微地抑制作用,未观察到该化合物对HuH-7有明显的细胞毒效应。体外细胞侵袭实验结果表明,24F能够减少穿过Matrigel的HuH-7细胞数目,显示其对肿瘤细胞侵袭和游走运动能力的抑制作用。24F能够在体外抑制血管内皮细胞HUVEC形成微管样结构,提示24F具有潜在的抑制肿瘤新血管生成的能力。

最后,分子动力学验证了分子对接的结果并对结合中各种作用力和关键氨基酸/脱氧核苷酸进行了详细的探讨。第五章,对本论文的工作作了扼要总结与展望。
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,其中约90%患者表达雌激素受体α(estrogen receptor a, ERa)、孕激素受体(progesterone receptor, PR)或表皮生长因子受体AZD8055分子量2(human epidermal growth factor receptor 2, HER2)，内分泌治疗或分子靶向治疗可很大程度上改善这部分患者的预后。然而,原发性或获得性耐药的发生则给上述患者的治疗带来极大的挑战。此外,还有约10%的乳腺癌患者ER、PR和HER2受体均为阴性,即三阴性乳腺癌(triple-Linsitinib购买negative breast cancer,TNBC),由于缺乏特异性的治疗靶点预后较差。因此,确定新的分子治疗靶点,对于临床乳腺癌患者的预后至关重要。目前,已有相当一部分研究开始关注乳腺癌治疗过程中复发和药物耐药的发生机制,并由此确立了一些新的、具有潜在应用价值的分子靶点,如细胞周期蛋白依赖性激酶4和6(cycselleck化学药品lin-dependent kinase 4 and 6, CDK4/6)、Src、雄激素受体(androgen receptor, AR)等。此外,有研究证实,microRNAs(miRNAs)在乳腺癌中发挥着重要作用,为乳腺癌的治疗提供了实验依据。对于那些缺乏有效、特异性治疗靶点的肿瘤亚型,如TNBC,miRNAs也可能成为其新的治疗手段。将miRNA作为辅助工具应用于治疗似乎具有一定的前景。

与遗传变异不同,表观遗传具有可逆性。某些肿瘤细胞通过表观遗传改变产生了耐药、肿瘤细胞转移等的表型变化,均可以利用调控表观遗传的药物进行逆转和治疗。由于表观遗传调控剂类药物对正常细胞和组织影响小,在肿瘤治疗中有效,因此已成为提高当前抗癌药物治疗作用的重要突破口。在表观遗传修饰研究中,组蛋白去乙酰化酶(histone deaeetylases,HDACs)是近二十年来研究最广泛的靶点之一。该酶是购买Tariquidar一类真核细胞中广泛存在的金属酶。根据各亚型的结构不同,HDACs可分为HDACsⅠ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ亚族,其中HDACsⅠ、Ⅱ和Ⅳ亚族属于Zn2+依赖性蛋白酶,HDACsⅢ亚族需要依赖NAD+发挥作用。HDACs主要作用是催化组蛋白底物和非组蛋白底物的去乙酰化反应,从而实现调控基因表达、影响蛋白质的稳定性和生物活性等。许多研究均证实,HDACs各亚型在多种癌症组织中过度表点击此处达,并影响癌细胞的细胞周期、分化、凋亡、侵袭和转移和血管生成。因此HDAC作为一个与癌症的发生与发展密切相关的靶点,越来越受到各国科学家重视。自2006年以来,先后有Vorinostat和Romidepsin两个药物被FDA批准上市用于治疗皮肤T-细胞淋巴瘤。目前HDAC抑制剂已成为抗癌新药研发的热点,除了上市的药物外还有十几个该靶点的药物正在进行临床评价。本课题通Abiraterone分子量过对伏立诺他(Vorinostat)的合成方法进行研究。选用两步混合酸酐法制备,针对工艺路线中的关键因素进行改进。第一步中通过改进加料方式减少了副产物的生成,收率提高约4%,同时改用毒性较小的氯甲酸异丁酯,更加环保；第二步中换用DMF作溶剂,可缩短反应时间,减少溶剂用量,而且经研究发现后处理无需蒸干溶剂,从而进一步简化操作步骤。该反应方法还可以用于制备在四氢呋喃等溶剂中溶解度差的异羟肟酸。该法适于合成原料或产物遇碱不稳定的物质,具有良好的适用性。

TOPK的活化是有丝分裂早期的重要步骤,TOPK和cdk1/cyclin B1复合体结合,使胞质分裂蛋白1磷酸化,从而促使细胞分裂,从而加速细胞G2/M期进程促进细胞的增殖。TOPK激酶甚至可以和肿瘤抑制基因p53的DCD结构域相结合从而阻断p53的作用,促进细胞周期蛋白如p21的表达。近来研究还发现Cdk1激活调控的TOPK激购买CAL-101酶活化后,可以瞬时调节在细胞分裂中的多种DNA连接蛋白,并且可以在几分钟内调控这些蛋白的前体。C2H2锌指蛋白就是这一大类保守蛋白,其包含有多个锌指结构域的保守区域,TOPK激酶是首个证实在有丝分裂中可以和这些保守区域结合进而调控整个转录因子的蛋白激酶。TOPK在白血病、淋巴瘤、乳腺癌、皮肤癌、宫颈癌、JQ1肺癌和结肠癌等多种恶性肿瘤中呈现高表达,并且和肿瘤预后密切相关。TOPK在这些不同的肿瘤中通过激活不同的信号通路参与肿瘤的发生发展和转移,甚至还参与了肿瘤耐药的形成,降低了肿瘤治疗的有效性。替普瑞酮和甲羟戊酸治疗抵抗的乳腺癌患者中,Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)诱Selleckchem PD-1/PD-L1 inhibitors导的TOPK蛋白表达增加对促进乳腺癌细胞增殖起到了重要作用。此外,报道TOPK激酶通过直接磷酸化c-Jun S73和S63促进肺癌细胞对EGFR抑制剂吉非替尼耐药性的产生。这些研究表明TOPK有可能成为肿瘤治疗的有效治疗靶点。然而,TOPK在食管鳞癌中的功能及其机制尚没有文献报道,因此,进一步研究TOPK在食管鳞癌中的功能及其机制可以为TOPK成为食管鳞癌的治疗靶点提供理论依据。

方法:在体外以人耐伊马替尼K562细胞为研究对象,分成对照组和实验组进行细胞培养,对照组不加任何药物,实验组共分6组分别加入不同浓度STI571、ATO、AMN107以及联合用药STI571+ATO、AMN107+ATO、STI571+AMN107。MTT比色法测定药物对K562G细胞生长抑制率的影响,PI单染色法流式细胞仪检测K也许562G细胞凋亡率,荧光定量PCR检测K562G细胞BCR/ABL融合基因的表达水平。 结果: 1.MTT检测实验结果示:(1)耐药浓度范围内STI571对K562G细胞生长无明显抑制作用。(2) ATO对K562G细胞生长有抑制作用,呈剂量依赖性。(3) AMN107对K562G细胞生长有抑制作用,呈剂EPZ-6438核磁共振量依赖性。(4)联合用药STI571+ATO组对K562G细胞生长有抑制作用,呈剂量依赖性,比单用ATO组(除1.0μmol/L外)有显著性差异(P<0.05)。(5)联合用药AMN107+ATO组对K562G细胞生长有明显抑制作用,呈剂量依赖性,各浓度比单用AMN107组或单用ATO组有显著性差异(P<Ruxolitinib细胞系0.05)。(6)联合用药STI571+AMN107组对K562G细胞生长有明显抑制作用,呈剂量依赖性,各浓度组比单用AMN107组有显著性差异(P
目的:1.探讨雷公藤甲素(TP)对耐药慢性粒细胞白血病(CML)细胞株(K562/G01)增殖抑制和诱导凋亡的作用。2.探讨TP对K562/G01中Wnt/β-catenin信号通路的调控影响。3.为TP对CML的临床治疗提供理论基础。

EGFR与配体结合后可发生同源或异源二聚体化，导致其胞内段受体酪氨酸激酶发生自身磷酸化，主要通过ERK、Akt和JNK通路传导活化信号。当其异常活化或降解抑制时，可导致包括肿瘤在内的多种疾病发生。有研究证明，许多人类肿瘤中均过表达EGFR，且EGFR的表达水平与治疗反应不佳、疾病恶化及存活率低相关。 细丝蛋白Aselleck化学（Filamin A，FLNa）是第一个在非肌细胞中被发现的肌动蛋白结合蛋白。其可形成同源二聚体，与肌动蛋白交联构成动态三维立体结构。FLNa作为脚手架可锚定90余种伴侣分子，其中包括多种细胞膜受体，调控诸如细胞形状、细胞移动、胞内转运等多种细胞功能和生理过程。最近研究发现，肿瘤发生不没有仅与EGFR持续活化、蛋白降解抑制有关，并且与FLNa构成的复杂信号转导网络有关，可由于FLNa异常表达影响其与伴侣锚定联接，导致肿瘤发生。尽管已证实FLNa与导致恶性肿瘤的信号异常有关，但其具体机制仍有待研究。 我们利用不表达FLNa的人恶性黑色素瘤M2细胞株和经FLNa基因转染M2也许细胞获得的稳定表达FLNa的M2A7细胞进行的实验结果显示，虽然M2细胞EGFR蛋白表达量明显高于M2A7细胞，但经EGF刺激后EGFR磷酸化的量却明显少于M2A7细胞。此结果提示，EGFR表达量的多少并不代表其活化程度，可能还有其它因素调控着EGFR的活化，临床上不能仅仅根据EGFR的表达量来评价肿瘤患者的预后，研究调控EGFR活化的新机制具有重要的理论和实用价值。

统计学的处理:数据的分析处理采用统计软件SPSS 20.0进行,所有的数据都用均数±标准差(x±s)的形式表示,统计结果出现P0.05)。多元逻辑回归分析显示,腰椎MGP、BMP2及RUNX2 m RNA表达与BMD相关(分别是OR 1.016,95%CI0.809-0.991,P=0.029;OR1.230,95%CI1.063-1.424,P=0.015;OR 1.因为107,95%CI1.016-1.205,P=0.048)。免疫组织化学结果显示,骨小梁周边的成骨细胞及骨髓基质细胞胞浆均可见Fetuin-A、BMP2、RUNX2、MGP的阳性表达,骨小梁周边的破骨细胞还可见到MGP的阳性表达。与非骨质疏松组相比,PMOP组MGP的光密度值水平较高(P<0.05)而BMP2和RUNX2水平较低(P<0.05或时间P0.05);4、同治疗前相对比,B、C两组都能有效改善患者的临床症状、增加患者腰椎及股骨颈的骨密度、提高血清Fetuin-A及MGP的水平(P0.05);其中C组能更快缓解疼痛,且对腰椎骨密度的升高效果更为显著(P0.05)。结论1、临床与试验研究提示,MGP与PMOP有一定的相关性,而FMC很可能通过影响骨矿化从而影响PMOP的发病;补肾中LDN-193189分子量药治疗PMOP有中医的理论基础,也有现代试验研究的支持。2、低血清MGP m RNA水平可能与PMOP的发病有关,而雌激素参与对血清MGP的调控。3、血清FMC的合成减少及MGP在局部骨组织聚集,可能通过影响BMP2/Smad/Runx2信号通路,抑制正常的骨矿化,从而影响PMOP的发生。4、中药淫羊藿能够改善PMOP肾阳亏虚证患者的临床症状,增加BMD,并且其效果跟用药剂量呈相关,其作用机制可能与增加血清FMC的合成有关。