05),且对其中的五个维度积分值的改善优于尼莫地平(P＜0.05),但其联合尼莫地平治疗对八个维度的积分均能明显改善(P＜0.05),并且均优于尼莫地平(P＜0.05)。降压胶囊及其联合尼莫地平治疗后均能明显降低患者尿微量白蛋白及β_2微球蛋白的水平(P＜0.05);联合用药后降低患者尿微量白蛋白作用又明显优于单纯中药或西药组。降压胶囊及其联合尼地平两组均能改善EISH患者血浆(清)NO、ET-1、TXB_2、6-Keto-PGF_(1α)、hs-CRP水平,均优于治疗前(P＜0.05,P＜0.01);联合治疗降低血浆TXB_2水平作用又优于单纯中药或单纯西药组(P＜0.05)。 (3)降压胶囊及其联合尼莫地平治疗8周后,均能明显降低SHR模型收缩期血压值(P＜0.05,P＜0.01),而治疗4周后,仅降压胶囊大剂量联合尼莫地平有明显的降压效应(P＜0.05)。降压胶囊(大剂量组)及其联合尼莫地平治疗后,能明显降低SHR左室重量及其左室重量指数(P＜0.05);同时,能明显降低SHR血浆ET、AngⅡ水平,且升高SHR血浆CGRP水平(P＜0.05),尤其降低ET及升高CGRP水平作用均优于西药尼莫地平(P＜0.05)。降压胶囊及其联合尼莫地平各剂量组均能够使SHR心肌AT1受体蛋白及mRNA表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01);但降压胶囊联合尼莫地平治疗后,这种表达的降低更为显著,既优于单纯中药组又优于单纯西药组(P＜0.05,P＜0.01)。
结论降压胶囊对EISH有较好的临床疗效,改善细胞内皮功能、抗炎及降低心肌AT1受体蛋白及mRNA表达等可能是其部分作用机制。降压胶囊联合尼莫地平的病证结合治疗模式,对EISH的治疗有明显的协同效应,值得推广应用。
肝纤维化是指由多种慢性疾病引起的肝脏持续创伤修复反应而导致的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)过度沉积。严重的肝纤维化导致肝硬化并引起肝功能衰竭,门静脉高压甚至需要肝脏移植治疗。长期以来广泛持续的肝纤维化被认为是不可逆转的,而越来越多的研究证据表明,肝纤维化甚至肝硬化都有逆转的可能。对肝纤维化细胞及分子机制的研究表明,多种细胞参与了肝纤维化的形成,其中激活的肝星状细胞(hepatic 并且 stellate cells,HSCs)被认为是促进ECM过度沉积的主要细胞,而多种细胞因子参与了肝星状细胞的激活,其中转化生长因子β_1(transforming growth factor,TGF-β_1)被认为是最关键的因素之一。其可激活HSCs和调节ECM的合成和降解平衡。以干扰HSCs中TGF-β_1及其细胞信号转导通路为靶点的抗肝纤维化治疗已成为当今研究的热点之一。而在肝纤维化及其胶原合成过程中,除TGF-β_1及其细胞信号转导通路外,尚有其他信号途径参与。前列腺素E_2(prostaglandin
E_2,PGE_2)、PGE受体-2(PGE receptor-2,EP_2)及环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)所构成的信号转导途径,即PGE_2-EP_2-cAMP通路在多种免疫性疾病中发挥重要作用,越来越多的研究表明PGE_2-EP_2-cAMP信号转导途径参与了肝纤维化的调节,通过调节其信号转导可能为肝纤维化的治疗提高新的靶点。尽管对抗肝纤维化药物的研究不断深入,而目前结果仍不令人满意。 黄芪(Radix Astragali)作为一种宝贵的中药具有悠久的应用历史,黄芪总皂苷为从荚膜黄芪(Astragalus
什么 membranaceus)根中提取的有效部位,多年来大量的研究表明黄芪总皂苷具有抗炎、衰老、抗氧化、抗心肌损伤及免疫调节的作用且无明显的毒副作用。本课题组以往的研究表明,黄芪总皂苷可显著的抑制四氯化碳引起的肝脏损伤及肝纤维化的形成。黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,ASG-Ⅳ)是一种环波罗烷型三萜糖苷,从中草药荚膜黄芪中提取纯化而得,目前对AGS-Ⅳ对免疫性肝纤维化的影响尚不清楚。基于以往对黄芪在保护肝脏中的应用及本课题组对黄芪总皂苷抗肝纤维化作用的研究基础,本研究探讨了对单体AGS-Ⅳ抗猪血清诱导的大鼠免疫性肝纤维化的体内作用,从病理学及血清学角度对其抗肝纤维化作用进行分析,并观察了AGS-Ⅳ对大鼠血清TGF-β_1水平及肝脏组织的影响。体外研究观察了AGS-Ⅳ对HSCs增殖、凋亡及胶原合成的影响及对TGF-β_1/Smads信号转导的调节。在肝纤维化的形成及TGF-β_1刺激的HSCs胶原合成中,PGE_2-EP_2-cAMP信号通路与TGF-β_1刺激HSCs胶原合成的有着怎样的关系呢?而AGS-Ⅳ是否会通过对PGE_2-EP_2-cAMP信号通路的影响而发挥其抗肝纤维化作用呢?为此,本实验通过对猪血清诱导大鼠肝纤维化形成过程中PGE_2水平及EP_2表达的改变进行观察,并使用选择性环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂降低PGE_2水平,分析EP_2表达的改变,深入的观察了PGE_2-EP_2-cAMP在猪血清诱导大鼠肝纤维化形成过程的作用;在体外观察了PGE_2-EP_2-cAMP对TGF-β_1刺激HSCs胶原合成中的影响,并从PGE_2-EP_2-cAMP信号通路角度研究了AGS-Ⅳ抗肝纤维化的机制。 目的 探讨AGS-Ⅳ抗猪血清诱导大鼠免疫性肝纤维化作用;探讨AGS-Ⅳ对体外培养HSCs增殖、凋亡及胶原合成的影响及对Smad3和Smad7蛋白表达的影响;探讨PGE_2-EP_2-cAMP信号通路在肝纤维化形成中的作用及AGS-Ⅳ对其影响。 还有 方法 猪血清连续8周腹腔注射(0.5 ml,每周2次)诱导大鼠免疫性肝纤维化,同时给予AGS-Ⅳ(2.0,4.0 mg·kg~(-1))灌胃治疗。检测大鼠肝脏组织病理及血清学指标改变,ELISA法检测大鼠血清TGF-β_1水平,免疫组化法检测大鼠肝脏组织TGF-β_1表达。[~3H]标记胸腺嘧啶核苷酸([~3H]-thymidine,[~3H]-TdR)掺入法检测血小板源性生长因子(PDGF-BB)刺激的HSCs增殖,流式细胞仪分析HSCs凋亡。TGF-β_1刺激的HSCs胶原合成采用[~3H】标记脯氨酸([~3H]-proline,[~3H]-Pro)掺入法检测,westernblot法检测Smads蛋白表达。选择性COX-2抑制剂塞来昔布(celecoxib)15mg·kg~(-1)灌胃,以检测POE_2及EP_2蛋白的变化及其在大鼠肝纤维化形成中的作用。检测PGE_2(5,500nM)和EP_2 agonist ONO-AE1-259-01(1,100nM)对TGF-β_1诱导HSCs胶原合成的影响及细胞内cAMP水平的改变;分析AGS-Ⅳ对HSCs中EP_2表达及胞内cAMP水平的影响。 结果 1.AGS-Ⅳ对猪血清诱导肝纤维化的保护作用 AGS-Ⅳ两个剂量2.0 mg·kg~(-1)和4.