5、15、30、60 mmol/L)处理后的EPCs凋亡率,挑出最佳浓度;使用高糖(30 mmol/L)和氧化应激拮抗剂Tempol、TNFR1受体拮抗MAB430共同作用,流式细胞仪检测细胞凋亡率;使用分子探针(DCFH-DA)检测不同糖浓度处理后EPCs的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)含量变化;使用Western blotting检测不同糖浓度和TNFR1受体拮抗MAB430处理EPCs后,其细胞表面TNFR1受体以及由其介导的细胞内信号通路相关蛋白(TRADD、TRAF2、RIP、NF-k

Bp65、Caspase3)表达的情况。结果:在使用M199培养基培养3天后,EPCs大部分贴壁,呈圆形,逐渐增大伸展,培养至7天后,细胞生长迅速,镜下可见其呈集落样生长,培养至14天后,观察可发现细胞出现“鹅卵石”样形态分布。通过激光共聚焦显微镜观察细胞可见经过Di PI3K抑制剂 I-ac-LDL处理后阳性的EPCs为红色荧光,结合了FITC-UEA-1后的EPCs为绿色荧光,双染法阳性的细胞为正在分化的EPCs,表明所培养的细胞为EPCs。在高糖刺激EPCs的早期(24-48h),高糖组与对照组之间比较,没有明显的凋亡增加,而随着高糖刺激时间的延长,即高糖刺激的晚期(72-96h),可以发现高糖刺激组与正常对照组比较,凋亡细胞数目增加,高糖组(15mmol/L,30mmol/L,60mmol/L)与对照组进行组内比较,具有统计学意义(P<0.01),同时在实验的早期,高糖组与对照组比较,ROS的值没有明显的增加,而随着刺激时间的延长,刺激的晚期(72h),发现高糖组ROS增加明显,与对照组比较,具有显著统计学意义(P<0.01),在刺激的早期和晚期,分别用Tempol、MAB430(TNFR1受体拮抗剂)处理后,发现与高糖组比较,早期ROS值没有明显的降低,而晚期ROS值有明显的降低,并且与高糖组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01),氧化应激拮抗剂Tempol、TNFR1受体拮抗剂MAB430在72h能够降低上述TNF凋亡信号通路相关蛋白的表达,蛋白表达量有统计学意义(P
背景：尿酸是人体内嘌呤代谢的最终产物,随着人们生活水平的提高、饮食条件的改善及环境与遗传因素的改变,高尿酸血症已成为威胁人类身体健康疾病之一。越来越多的流行病学研究发现尿酸的升高与心血管疾病、肾脏疾病以及代谢综合征等密切相关。研究发现尿酸可为一种抗氧化物质,生理浓度下的尿酸对内皮细胞可起到一定的保护作用,也有研究证实高浓度的尿酸也会转化为促氧化物质而对内皮细胞进行损害。那么轻度的尿酸升高是否也会影响内皮细胞的增殖及死亡,给予一定的氧化刺激后是否会加重内皮细胞的损伤,目前缺乏这方面的研究。通过对不同浓度的尿酸和氧化应激状态下尿酸升高对内皮细胞损伤机制的研究,期望有助于探讨临床无症状高尿酸血症或伴有高脂血症、糖尿病等造成氧化应激状态情况下尿酸升高是否要进行早期预防与治疗。目的：1)通过不同浓度的尿酸(UA)及H202刺激体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后的增殖情况,一氧化氮(NO)的合成,膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)的分泌,观察氧化应激状态下UA升高对血管内皮细胞功能的影响；2)通过观察氧化应激状态下不同浓度UA对HUVECs

Ruxolitinib小白鼠 p38MAPK蛋白表达的变化及使用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预后它们的改变,探讨p38MAPK信号通路是否参与氧化应激状态下UA对HUVECs损伤机制的研究。方法：1)以原代HUVECs 4-6代为实验对象,设立单纯尿酸组(0、4、6、8、10mg/dlUA)及尿酸+过氧化氢组(0、4、6、8、10mg/dl

Lonafarnib体内 UA+100μmol/l H2O2)两个实验组。2)UA及H202刺激HUVECs 24h后,通过CCK-8法检测HUVECs的活力,硝酸还原酶法检测细胞培养上清液中NO的含量,化学发光法测定超氧化物歧化酶(SOD)水平,硫代巴比妥法测定细胞膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)的含量；3) Western blot检测氧化应激状态下UA刺激HUVECs后p38MAPK蛋白的表达情况。结果：1)CCK-8结果测定显示：UA(8、10mg/dl)组HUVECs活力较对照组(0 mg/d1)有显著降低(P0.05,差异无统计学意义；2)氧化应激状态下不同浓度的UA随着UA浓度的升高,p-p38MAPK蛋白表达逐渐增强,且与对照组Omg/dl UA组比较,6mg/dl、8mg/dl、10mg/dl UA组p值均0.05,无统计学意义；3)加入p38MAPK特异性抑制剂SB203580后,氧化应激状态下的不同浓度UA组p-p38MAPK及p38MAPK蛋白表达均未有明显变化(p>0.05)；4)与对照组(8mg/dl UA组)相比,H202组及H202+UA+SB203580组p-p38MAPK和p38MAPK的蛋白表达p值均>0.