2%的细胞被阻滞在G0/G1期,而在未处理的细胞中,仅有52.9%的细胞处于G0/G1期。RT-PCR及蛋白质免疫印迹显示在予TNF-α处理后,施万细胞内SSeCKS的α亚型的mRNA水平、蛋白水平及磷酸化水平较正常细胞以剂量依赖的方式增加。在予TNF-α处理SSeCKS的α亚型干扰的施万细胞,细胞增殖分析及流式细胞分析术发现降低SSeCKS的α亚型的表达可以逆转TNF-α诱导的施万细胞的增殖抑制及G0/G1期的阻滞。进一步分析其原因,发现cyclin selleck化学 D1的表达及ERK1/2的激活水平随着TNF-α的浓度增加而降低,干扰SSeCKS的α亚型表达可以逆转TNF-α诱导的cyclin D1的表达水平及ERK1/2的激活水平的降低。同时,TNF-α可以诱导施万细胞中cyclin D1的细胞核定位减少及cyclin

D1与SSeCKS结合能力的增加,干扰SSeCKS的α亚型的表达可以逆转cyclin D1细胞核定位的减少。 3、用cAMP诱导施万细胞体外分化中,SSeCKS的表达随着诱导的时间的延长而降低。用EGFP标记的SSeCKS siRNA的慢病毒载体干扰施万细胞中SSeCKS的表达可以加快体外诱导的细胞分化的形态改变,同时在SSeCKS表达干扰的施万细胞中,分化的标记髓鞘蛋白0(myelin protein zero,P0)及髓磷脂相关糖蛋白(myelin associated glycoprotein,MAG)的表达较未干扰组增加。将干扰SSeCKS表达的施万细胞与神经元共培养诱导髓鞘的形成,发现干扰了施万细胞中SSeCKS的表达可以促进体外形成髓鞘的数量。进一步分析其机制,发现干扰SSeCKS的表达可以促进Akt 473号位丝氨酸的磷酸化。 结论 1、施万细胞中存在着TNF-α的自分泌循环,其分泌的TNF-α可以作用于自身,诱导自身的JNK和p38信号转导通路的激活,促进TNF-α的合成和分泌;TNF-α作用于施万细胞后,表达增多的SSeCKS可以通过促进JNK和p38的激活,在TNF-α的自分泌循环中发挥着正向调控作用。

2、TNF-α以剂量依赖的方式抑制施万细胞的增殖,诱导施万细胞中SSeCKS的mRNA水平、蛋白水平及磷酸化水平的上调,同时可以抑制cyclin D1的表达及细胞核定位。SSeCKS在TNF-α诱导的施万细胞增殖抑制中发挥着负性调控作用。这主要是通过抑制ERK1/2激酶的活性,下调cyclin D1的表达及增加与cycling D1结合,抑制cyclin D1的细胞核转位发挥作用。 3、SSeCKS在施万细胞的分化过程中表达下调,其可以抑制施万细胞的体外分化及髓鞘的形成;SSeCKS在施万细胞体外分化及髓鞘形成中的负性调控作用主要是通过抑制Akt的活化发挥作用。
[研究背景及目的] 在损伤、感染性疾病、神经退行性病变以及其他多种类型的神经系统疾病中,炎症反应是共同的特征。这些疾病的病程中都包含有炎症细胞的活化及炎症介质的合成与释放。这些炎性介质可以通过诱导细胞免疫,促进吞噬作用,对神经元起保护作用;但是,炎性介质的过多堆积改变了机体的内环境,不利于细胞正常状态下生物学功能的发挥,并导致神经元的凋亡和胶质细胞的损伤,这是促使神经纤维发生脱髓鞘病变的重要推动因素之一。 细胞间粘附分子-1(intercellular small molecule library screening adhesion molecule-1,ICAM-1)是一类大小为76kD-114kD的细胞表面跨膜糖蛋白,是免疫球蛋白超家族中的一员,由位于胞外的5个Ig样区域、一段跨膜区域以及一段胞质尾区组成。在细胞表面,ICAM-1是膜结合整合素受体淋巴细胞功能相关抗原-1(Lymphocyte Function-Associated Antigen,LFA-1)和单核细胞粘附分子-1(monocyte adhesion molecules-1,Mac-1)的配体。ICAM-1糖基化可以迅速影响其与Mac-1的结合,但是对其与LFA-1的结合影响较少。在多种炎症因子诱导的炎症中,ICAM-1表达上调并促进淋巴细胞的募集。 周围神经损伤后,大量炎症因子分泌,单核巨噬细胞向损伤局部聚集。在周围神经损伤后的Wallerian变性过程中ICAM-1其与配体Mac-1和LFA-1参与细胞的募集。在中枢神经系统(central

Selleck Bardoxolone nervous system, CNS)炎症性疾病的早期,ICAM-1是一种重要的粘附分子,介导了白细胞与内皮细胞粘附后穿过血脑屏障进入脑组织的过程。在脑内,淋巴细胞向炎症部位的迁移需要ICAM-1。这些现象表明在CNS炎症性病理过程中ICAM-1扮演着非常重要的角色。在本文研究中,我们拟在前人的研究基础上,分别从周围神经损伤所致的周围神经炎症,LPS(lipopolysaccharide)腹腔注射所致的全身炎症及LPS脊髓内注射所致的局部炎症等多角度分别研究ICAM-1在神经系统炎症中的作用,从而为阐明ICAM-1在神经系统免疫调节中的作用提供理论基础,为神经系统炎症性疾病的治疗提供依据。 [方法] 1.建立大鼠坐骨神经夹伤和切断的周围神经损伤模型,LPS腹腔注射的全身炎症模型及LPS脊髓内注射的脊髓局部炎症模型。 2.运用RT-PCR、Western Blot的方法检测坐骨神经,背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)及脊髓组织中ICAM-1表达的时空变化,运用免疫荧光双标,观察ICAM-1在这些组织中的细胞定位;分析施万细胞及小胶质细胞活化与ICAM-1表达水平之间的相关性。 3.分离培养并纯化大鼠施万细胞。在细胞水平,运用RT-PCR、Western Blot、免疫荧光及酶联免疫吸附等技术,检测LPS对ICAM-1表达、亚细胞定位的影响;并通过运用丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路抑制剂分析炎症刺激诱导ICAM-1表达的信号通路。 [结果] 1. 1)坐骨神经切断和夹伤后,ICAM-1在坐骨神经及相应背根神经节中表达均出现上调,后逐渐恢复正常。 2)正常状态下,ICAM-1在坐骨神经及DRG中表达较少,主要定位于血管内皮细胞。坐骨神经夹伤及切断后,ICAM-1主要定位于坐骨神经中的施万细胞和相应DRG中的神经元,与卫星细胞较少共定位。 2.