Western blotting检测Hif-la的蛋白表达水平。 3.K562-R与骨髓间充质干细胞共培养实验：骨髓间充质干细胞分离：骨髓液提取有核细胞,弃去悬浮细胞,贴壁培养。将骨髓间充质干细胞按105/孔种于6孔板,用1.5μg/ml丝裂霉素处理48h后按106/孔种入K562-R细胞共培养72h以上。分为2组,分别在正常氧浓度下、1%氧浓度下培养48h。PI染色流式细胞术测定各组K56www.selleckchem.cn/products/RO4929097.html2-R细胞周期。Pyronin、Hoechst33342双染法检测各组K562-R GO期细胞。CCK-8检测伊马替尼对各组K562-R细胞的生长抑制率。RT-PCR检测各组K562-R Siah2、Hif-la的mRNA转录水平。Western blotting检测Siah2、Hif-1a的蛋白表达水平。 4.维生素K3处理K562-R实验：以0、5、15、30mLY294002 花费M浓度用维生素K3处理K562-R72h,提取蛋白用western blotting法检测Siah2、Hif-1a的蛋白表达水平。在15mM浓度维生素K3处理下分别于0、24h、72h三个时间点用western blotting法检测Siah2、Hif-la的蛋白表达水平。以15mM浓度维生素K3处理K562-R分为两组分别于正常氧浓度、低氧1%氧浓度48h培养后,www.selleckchem.cn/products/gsk1120212-jtp-74057.htmlPI染色流式细胞术测定各组K562-R细胞周期。Pyronin Y、Hoechst33342双染法检测各组K562-R GO期细胞。CCK-8法检测伊马替尼对各组K562-R细胞的生长抑制率。Western blotting检测Siah2、Hif-1α的蛋白表达水平。 5.统计学分析：采用SPSS17.0统计软件进行数据分析。目的基因ACT值,凋亡率、细胞周期百分比,若方差齐,运用单因素方差分析法,检验组间差异是否显著；若方差不齐,采用秩和检验。