氢饱和生理盐水的制备：利用氢气发生器生产高压氢气，再将高压氢气通入氯化钠溶液中达到饱和浓度即可，现制现用。2.大鼠重症急性胰腺炎相关性肺损伤模型的建立及处理：将54只健康SD雄性大鼠随机分成假手术组（Sham组）、模型组（SAP+NS组）和氢水处理组（SAP+H2组），各组再分成6h、12h、24h三个时间点，每个时间点6只大鼠。Sham组大鼠开腹翻动胰腺数次后随即关腹，不作其他处理，SAP+NS组和SAP+H2组以5%牛磺胆酸钠（1ml/kg）经胆胰管开口逆行注入（0.1ml/min）建立模型，在建模成功后1h经尾静脉分别注射等量的生理盐水或氢饱和生理盐水(5ml/kg)。各组分别在6h、12h、24h三个时间点处死大鼠，收集血清、肺组织及胰腺组织。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清TNF-α、IL-1β含量；分光光度计法测定肺组织中髓过氧化物酶（MPO）的活性；荧光定量PCR法检测肺组织中TNF-α-mRNA、IL-1β-mRNA的表达；Western

NLG919 blot法检测肺组织中P-JNK蛋白的表达；用肺组织湿干重比,反映肺脏水肿程度；并对胰腺组织、肺组织进行HE染色病理学检查。以上所得数据采用均数±标准差（X—±S）表示，运用SPSS17.0统计软件进行统计学分析；样本均数的比较采用方差分析；两者的相关性采用直线相关和回归分析，P＜0.05，则差异有统计学意义。结果：（1）SAP+NS组和SAP+H2组血清中TNF-α含量、肺组织中TNF-αmRNA表达水平、肺组织中P-JNK蛋白的表达、肺组织湿干重比，在6h、12h、24h各个时间点均高于Sham组（P<0.05），SAP+H2组与SAP+NS组比较，SAP+H2组在各个时间点均低于SAP+H2组（TNF-α含量：204.1±8.5VS215.3±6.0，P<0.05；122.4±10.3VS263.2±7.4，P<0.05；84.1±8.6VS288.0±5.6，P<0.05；2.51±0.11VS4.40±0.24，P<0.05；1.77±0.06VS6.00±0.37，P<0.05。P-JNK蛋白的表达：11.29±0.01VS11.77±0.01，P<0.05；10.59±0.02VS12.73±0.01，P<0.05；9.43±0.01VS14.12±0.01，P<0.05。肺组织湿干重比：3.7±0.2VS4.2±0.2，P<0.05；3.3±0.3VS4.9±0.2，P<0.05；3.2±0.2VS4.6±0.3，P<0.05），SAP+H2组与SAP+NS组比较，6h时无统计学差异，在12h、24h时SAP+H2组均低于SAP+NS组（IL-1β含量：80.3±8.3VS215.4±10.4，P<0.05；59.3±8.2VS254.3±8.6，P<0.05。胰腺和肺组织病理评分：7.5±1.1VS9.5±0.4，P<0.05；7.3±0.4VS9.8±0.3，P<0.05。4.6±0.2VS5.1±0.2，P<0.05；3.8±0.3VS6.3±0.4，P<0.05。MPO活性：3.3±0.2VS4.7±0.2，P<0.05；3.1±0.1VS4.9±0.2，P<0.05；1.29±0.03VS2.92±0.26，P<0.05）。（3）Person相关性分析表明肺组织中P-JNK蛋白的表达与肺组织损伤程度存在相关性。结论：1.经尾静脉注射氢饱和生理盐水对APALI有一定治疗保护作用。2.氢饱和生理盐水可能是通过其选择性抗氧化作用抑制JNK细胞信号通路的激活来实现对APALI的保护治疗作用。
目的

信号通路 探讨知母皂苷元（Sarsasapogenin, Sar）对高糖引起的海马神经元损伤是否有保护作用。 方法 选用出生0~24h的Sprague-Dawley(SD)大鼠乳鼠，无菌条件下取出大脑，动物解剖显微镜下分离出海马，剪碎后用0.125%胰蛋白酶消化，DMEM/F12培养基培养，培养7d的海马神经元用于实验。实验分两部分进行，第一部分研究不同浓度高糖对海马神经元的影响，实验分为五组：正常对照组：加入等量的培养基；高糖30mmol·L-1组，50mmol·L-1组和100mmol·L-1组，加入葡萄糖(30,50,100mmol·L-1)作用48h；甘露醇渗透压对照组，加入25mmol·L-1甘露醇和25mmol·L-1葡萄糖作用48h。应用MTT法检测不同浓度葡萄糖对海马神经元细胞活力的影响；Western

GDC-0199分子重量 blot法半定量分析不同浓度葡萄糖对海马神经元突触素蛋白表达的影响。第二部分研究Sar对高糖诱导的海马神经元损伤的保护作用，实验分为六组：正常对照组；高糖组（50mmol·L-1）；高糖+Sar (10,30,100μmol·L-1)，先加入Sar作用1h，然后加入高糖作用48h；单独Sar组，加入Sar（30μmol·L-1）作用48h。免疫荧光染色检测海马神经元突触素细胞内定位；Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变；Western blot法半定量分析Sar对高糖引起的海马神经元突触素、caspase-3及PARP蛋白表达水平的改变。 结果 形态学结果观察显示，刚刚种植的海马神经元胞体呈圆形，体积很小，折光性很强，均匀分布；培养1d后，大部分细胞伸出3-4个短小的突起，细胞几乎全部贴壁，其中有些细胞聚集成团；培养4d后，神经元胞体进一步增大，突起进一步增多并明显增长，连接形成交织的网状结构，神经元以多极神经元为主；培养7d后，细胞体积继续增大，胞体饱满，突起增长增粗，分支增多，形成致密的蜘蛛网结构。培养7d海马神经元，NeuN免疫荧光染色进行神经元纯度鉴定，经统计神经元纯度在90%以上。MTT实验结果显示，高糖（50和100mmol·L-1）环境可使海马神经元细胞活力及突触素蛋白表达较对照组明显降低。而相同渗透压的甘露醇对照组对神经元细胞活力及突触素蛋白表达均没有影响。而知母皂苷元（10,30,100μmol L-1）可明显对抗高糖引起的突触素蛋白表达的减少。Hoechst33258核染色结果显示，与对照组相比，高糖可使海马神经元凋亡细胞数明显增加，从正常对照组（8.144.18）%增加到（25.75.72）%。在加入高糖前1h，加入Sar（10,30,100μmol L-1）可明显对抗高糖引起的海马神经元凋亡，并呈明显浓度依赖性，凋亡百分率分别降至（19.415.35）%、（9.195.34）%和（8.484.