紫杉醇(paclitaxel,PTX)、吡柔比星(herarubicin,THP)均是骨肉瘤治疗常用的化疗药物,具有将细胞阻滞在特

紫杉醇(paclitaxel,PTX)、吡柔比星(herarubicin,THP)均是骨肉瘤治疗常用的化疗药物,具有将细胞阻滞在特定细胞周期的作用。基于此本课题除了研究紫杉醇、吡柔比星对骨肉瘤细胞MG-63的生长抑制作用,还重点对两种药物单用及联合使用对MG-63细胞的放射增敏作用、及其与药物作用时间的关系,并对其作用机制进行初步探讨,以期为临床提供更多的理论依据。 方法:C59浓度无菌实验室中将MG-63细胞置于37℃、饱和湿度5%CO2、10%胎牛血清的DMEM培养液中常规培养,取对数期细胞用于实验。 1光镜观察:将不同浓度的紫杉醇和吡柔比星作用于MG-63细胞,在倒置相差显微镜下定时观察细胞的生长情况并照相。 2细胞生长抑制试验:将细胞用胰酶消化后调整至3×104/ml,接种于96孔培养板,每孔100μl,培养至细胞贴壁AUY 922,加入不同浓度PTX(6、0.6、0.06、0.006、0.0006μg/ml)和THP (10、1、0.1、0.01、0.001μg/ml),置37℃培养箱培养24h后每孔加入新鲜配制的MTT再次孵育4h,弃去上清液,加入DMSO震荡10min,于酶标仪上测定各孔吸光度(测定波长520nm)并计算IC10。 3克隆形成实验:细胞在各组药物作用24SAHA HDAC分子量h后给予不同剂量(0、2、4、6、8Gy)照射以及药物作用不同时间(0、12、24、36h)后给予X线(4Gy)照射,10-14天后计数肉眼可见的细胞集落,计算出细胞的存活分数(surviving fraction,SF)并拟合细胞生存曲线。根据拟合参数计算放射增敏比(sensitivity enhancement ratio,SER)。并比较各组药物作用于MG-63细胞不同时间后进行照射细胞生存率的变化,确定最佳照射时间。

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