5kD的蛋白质,因其与FasL具有较高的同源性,该研究将其命名为凋亡素配体2(apoptosis2-ligand, Apo2L)。随后的研究发现Apo2L和TRAIL是同一种因子。 目前发现的TRAIL受体有5种：TRAIL-R1/DR4(death receptor4)、 TRAIL-R2/DR5(death receptor5)、TRAIL-R3/DcRl STAT抑制剂 (decoy receptor1)、 TRAIL-R4/DcR2(decoy receptor1)和骨保护素(osteoprotegerin, OPG)。按其功能和结构可分为三类：(1)死亡受体：DR4和DR5；(2)诱骗受体：DcRl和DcR2(3)可溶性受体骨保护素。DR4和DR5分别由468和411个氨基酸残基组成,二者有55%的同源性。TRAIL与这两种受体结合后诱导敏感细胞的凋亡。小鼠体内仅有DR5的表达。
TRAIL除了诱导细胞凋亡的作用外,研究还发现TRAIL有调节细胞增殖、迁移、分化,调节免疫应答功能和免疫耐受机制的作用,以及参与调节干细胞的生理功能。TRAIL主要由免疫细胞生产(如自然杀伤T细胞和单核巨噬细胞),而TRAIL的受体在体内是广泛表达的。在血管中,TRAIL受体在平滑肌细胞和内皮细胞中均有表达。因此,越来越多的证据显示TRAIL在调节正常血管生物学功能以及在血管疾病的发生中都可能具有重要作用。TRAIL功能缺失实验证实如果敲除TRAIL基因则导致ApoE-/-小鼠的动脉粥样硬化斑块增大,提示内源性的TRAIL可能对动脉粥样硬化发生具有保护作用。最近,Michowitz等进行的一项临床病例观察研究中,结果显示急性冠脉综合症病人血浆中可溶性TRAIL表达水平明显低于稳定性心绞痛和正常对照组,与C反应蛋白呈现负相关关系。该研究提示TRAIL对ACS患者斑块的稳定性可能起着一定的保护作用。根据这些研究结果人们提出TRAIL有可能作为一种新的治疗手段用于治疗与动脉粥样硬化相关的心血管疾病。 时间 然而,TRAIL对动脉粥样硬化的药理作用的量效关系尚没有被系统地诠释,目前一个尚未澄清的重要科学问题是过量产生的或外源性给予的TRAIL是否具真的具有抗动脉粥样硬化作用?值得注意的是,有不少证据显示过高的TRAIL水平可能具有促进动脉粥样硬化发生的作用。 例如,有研究报道,外源性TRAIL刺激可以增加血管平滑肌细胞和内皮细胞的炎症反应,上调E-选择素(E-selectin),细胞间粘附分子1(intercellular
adhesion molecule,(ICAM)-1)和白介素-8(interleukin (IL)-8)的表达。并且,在机体处于炎症状态下血浆TRAIL的水平呈升高趋势,而慢性炎症状态是诱发动脉粥样硬化的重要危险因素。虽然有一项研究报道在动脉粥样硬化合并糖尿病的小鼠中TRAIL可能通过引起巨噬细胞的凋亡而减轻斑块负荷,但这只是在晚期斑块且合并糖尿病的情况下观察到的,而且晚期斑块中巨噬细胞凋亡的增加还可能导致斑块的不稳定。因此,目前的研究证据还不足以证明给予外源性的TRAIL干预对动脉粥样硬化,特别是早期的斑块形成,是具有抑制作用还是促进作用。
目的 1.研究外源性TRAIL干预对动脉粥样硬化斑块形成的作用。 2.用双敲基因小鼠模型进一步证实DR5受体在动脉粥样硬化斑块形成的作用。 3.研究TRAIL对早期斑块和晚期斑块不同影响背后的机制。 方法 1.实验动物：8周龄雄性apoE-/-小鼠购自北京维通利华公司,8周龄雄性LDLR-/-小鼠购自南京大学模式动物研究所,DR5-/-小鼠购自美国Mutant Mouse Regional Resource Venetoclax分子量 Centers (MMRRC)。所有动物实验均符合山东大学齐鲁医院伦理委员会对动物实验的要求和规定。 2. TRAIL对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成的作用：将8周龄雄性apoE-/-小鼠分成正常对照组和TRAIL过表达组,TRAIL过表达组给予重组TRAIL腹腔注射(3μg每只,每周一次),持续4周或8周。对照组注射等量生理盐水。为了排除高脂饮食对TRAIL的影响,本研究设置普通或高脂饮食组。 3. TRAIL对LDLR-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成的作用：将8周龄雄性apoE-/-小鼠或LDLR-/-小鼠给予高脂饮食8周,然后在继续高脂饮食的基础上,分成正常对照组和TRAIL过表达组,TRAIL过表达组给予重组TRAIL腹腔注射(3μg每只,每周一次)8周。对照组注射等量生理盐水。4.DR5-/-apoE-/-小鼠模型构建：8周龄apoe-/-和DR5-/-小鼠按照一雄两雌进行交配繁殖,杂一代基因型均为DR5-/-apoE+/-，杂一代在8周龄时继续进行交配繁殖,后代经鼠尾组织DNA提取,PCR扩增后产物电泳分析后分出DR5-/-apoE-/-和DR5+/+apoE-/-小鼠。 5.组织样本采集：各组小鼠均禁食过夜,应用0.