原代培养的小胶质细胞，免疫荧光标记显示其CD11b阳性率＞90%,符合后续实验要求。免疫荧光双重标记染色表明小胶质细胞表达P2Y12受体蛋白，其阳性主要分布于小胶质细胞膜和胞浆内。 获悉更多 2.P2Y12受体激动剂，2MeSADP作用于小胶质细胞可促进其[Ca2+]i升高，而在预孵育P2Y12特异性阻断剂AR-C660962min后，2MeSADP诱发的小胶质细胞[Ca2+]i反应完全被抑制。 3.100μM2MeSADP刺激小胶质细胞24hr后可以诱导小胶质细胞活化，引起小胶质细胞表面形态的改变，而预孵育AR-C66096可以抑制这一效应。
4.100μM2MeSADP作用于小胶质细胞1hr后，培养液中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度显著增加，而AR-C66096可以抑制这种作用。 5.移除细胞外Ca2+后，100μM2MeSADP刺激小胶质细胞1hr后，其培养液IL-1β浓度与未移除细胞外Ca2+相比较有所降低。预孵育100μM G蛋白解偶联剂GDPβS、磷脂酶C（phospholipase C，PLC）拮抗剂新霉素后，再加入2MeSADP，其培养液IL-1β浓度与未孵育GDPβS、新霉素时相比有所下降。预先孵育100μM蛋白激酶A（proteinkinase A，PKA）抑制剂H-89后再加入2MeSADP，培养液中IL-1β浓度与未孵育H-89时未见明显变化。 6.移除细胞培养基中的Ca2+后，100μM2MeSADP作用于小胶质细胞1hr后，其培养液中TNF-α与未移除细胞外Ca2+相比明显下降。预孵育100μM G蛋白解偶联剂GDPβS、PLC拮抗剂新霉素、PKA阻断剂H-89以及p38MAPK通路阻断剂SB203580后，培养液上清中TNF-α与未孵育GDPβS、新霉素、H-89、SB203580时相比有所降低。而预先加入100μM蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）阻断剂Che后，再加入2MeSADP（终浓度100μM），其培养基上清中TNF-α浓度与未孵育Che时没有明显变化。 第三章： 1.原代培养小胶质细胞，免疫荧光双重标记表明小胶质细胞表达P2X7受体蛋白，其阳性主要分布于小胶质细胞膜和胞浆内。 2.100μM BzATP作用小胶质细胞24hr后可以诱导小胶质细胞活化，引起小胶质细胞表面形态的改变,而预孵育BBG可以抑制这一效应。 3.100μM BzATP作用于小胶质细胞1hr后，培养液中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度显著增加。而BBG可阻断此作用。 4.在缺乏细胞外Ca2+的环境中,100μM BzATP作用于小胶质细胞1hr后，其培养液中IL-1β浓度与未移除细胞外Ca2+相比明显降低。预孵育100μM G蛋白解偶联剂GDPβS、PLC拮抗剂新霉素后，再加入后再加入BzATP，其培养液IL-1β浓度与未孵育GDPβS、新霉素时相比未见明显改变。而预孵育100μM PKA阻断剂H-89后再加入BzATP，其培养液IL-1β浓度与未孵育H-89时则出现显著下降。
5.移除细胞培养基中的Ca2+后，100μM BzATP作用于小胶质细胞1hr后，其培养液中TNF-α与未移除细胞外Ca2+相比明显下降。预孵育100μM G蛋白解偶联剂GDPβS、PLC拮抗剂新霉素以及p38MAPK通路阻断剂SB203580后，培养液上清中TNF-α与未孵育GDPβS、新霉素、SB203580时相比未见明显改变。而预孵育100μMPKA抑制剂H-89、PKC阻断剂Che后，再加入BzATP（终浓度100μM），其培养基上清中TNF-α浓度与未孵育Che时出现明显下降。 此网站 第四章： 1.每日鞘内给予P2Y12受体激动剂2MeSADP，从给药3d开始，大鼠下肢痛阈开始出现明显降低，并伴有相关痛行为；至给药第7d达到最低值，停止给药后，痛阈曲线逐渐恢复至正常水平。在同时给予P2Y12受体拮抗剂AR-C66096+2MeSADP或单独给予P2Y12受体拮抗剂AR-C66096或PBS时，均未见大鼠痛阈出现明显改变。而在CCI模型大鼠鞘内给予AR-C66096后，则可以观察到大鼠痛阈下降趋势明显缓解并且与同时间CCI大鼠痛阈相比有明显提升，提示AR-C66096可以通过抑制P2Y12受体缓解CCI大鼠疼痛。 2.给予P2Y12受体激动剂2MeSADP的大鼠，L4~6段脊髓背角浅层CD11b阳性细胞数及光密度值均高于PBS对照组，且给药7d组，明显高于其他组别。CCI-14d大鼠脊髓背角小胶质细胞明显活化，CD11b阳性细胞数及平均光密度均高于对照组，CCI+AR-C66096组大鼠脊髓背角CD11b平均光密度与手术组相比显著降低。
3.每日鞘内给予P2X7受体激动剂BzATP，从给药第3d开始，大鼠出现明显的痛相关行为，检测痛阈发现大鼠下肢痛阈开始显著下降；至给药第7d达到最低值，停止给药后，痛阈曲线逐渐恢复至正常水平。在同时给予P2X7受体拮抗剂BBG+BzATP或单独给予P2X7受体拮抗剂BBG或PBS时，均未见大鼠痛阈出现明显改变。在CCI模型大鼠鞘内给予BBG后，可以观察到大鼠痛阈下降趋势明显缓解，与同时间CCI大鼠痛阈相比有明显提升，提示BBG可以通过抑制P2X7受体缓解CCI大鼠疼痛。 并且 4.给予P2X7受体激动剂BzATP的大鼠，L4~6段脊髓背角浅层CD11b阳性细胞数及光密度值均高于PBS对照组，且给药7d组，明显高于其他组别。CCI-14d大鼠脊髓背角小胶质细胞显著活化，CD11b阳性细胞数及平均光密度均高于对照组，而CCI+BBG组大鼠脊髓背角CD11b平均光密度与手术组相比明显降低。 结论： 1.P2Y12受体、P2X7受体均表达于原代培养的小胶质细胞表面，参与介导原代小胶质细胞的活化；2MeSADP激活P2Y12受体后诱发小胶质细胞[Ca2+]i升高； 2.2MeSADP可促进小胶质细胞释放IL-1β、TNF-α，这一效应是由P2Y12受体参与介导，受到细胞外Ca2+浓度影响，还受到PLC的调控，而不受PKC的影响； 3.BzATP可促进小胶质细胞释放IL-1β、TNF-α，这一效应是由P2X7受体参与介导，受到PKA调控，并受细胞外Ca2+浓度影响，而不受G蛋白和PLC的影响； 4.鞘内给予P2Y12受体激动剂或P2X7受体激动剂，大鼠热痛阈和机械痛阈均明显降低；脊髓背角CD11b表达显著增加； 5.