01)。并以CGRP10组作用最明显(P<0.01)；与NE组比较,NC组Cryab的表达出现了明显上调(P0.05)。 (6)与对照组(C组)比较,NE组、NC组、NC8组和CGRP组Cryab mRNA的表达均出现了下调,且以NE组、NC组最明显(P0.05)；与NC组比较,NC8组Cryab 有 mRNA的表达出现了轻微上调,但不明显,(P>0.05)。 结论(1)NE可抑制体外培养心肌细胞Cryab的农达。 (2) CGRP可上调体外培养心肌细胞Cryab的表达。 (3) CGRP可在一定程度上逆转由NE抑制的体外培养心肌细胞Cryab的表达。
动物内源性抗菌肽是一种广泛存在于动物体的呼吸道、消化道以及生殖道的具有广谱抗菌作用的阳离子多肽,在生物体的天然免疫和获得性免疫中扮演着重要的作用。禽β-防御素9(avian β-defensin9, AvBD9)是广泛表达于鸡体内组织尤其是消化道和免疫组织器官的一种重要抗菌肽,在鸡的抗感染免疫中发挥重要作用。乳酸杆菌作为小肠内优势菌群,其表面的细胞壁肽聚糖、脂磷壁酸等物质可以特异性地被肠道上皮细胞(intestinal epithelial

cells, IEC)表面的Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)所识别,进而启动下游的信号通路,调节免疫应答。 本实验提取了鼠李糖乳杆菌MLGA的5种细胞组分即细胞壁完整肽聚糖(whole 可能 cell wall peptidoglycan, WPG)、脂磷壁酸(lipteichoic acid, LTA)、全细胞壁组分(whole cell wall, WCW)、全细胞壁蛋白(cell wall protein, CWP)、灵李糖乳杆菌MLGA培养上清(Lactobacilli cultural supernatant, S);并采用荧光定量PCR的方法检测了5种细胞组分对原代培养的鸡小肠上皮细胞抗菌AvBD9基因表达的影响。结果表明,与对照组相比,鼠李糖乳杆菌MLGA白勺5种细胞组分均可以不同程度地促进AvBD9的表达,且不同细胞组分之间存在差异性。其中,鼠李糖乳杆菌MLGA的细胞壁完整肽聚糖(WPG)促进AvBD9基因表达的能力最强,且WPG对AvBD9基因表达的促进作用呈剂量和时间依赖性。 本实验采用抗TLR2特异性抗体封闭、凝胶迁移率实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMS A)和信号通路分子特异性抑制剂等方法进一步探讨了鼠李糖乳杆菌MLGA及其细胞组分完整肽聚糖调控AvBD9基因表达的可能信号转导途径。研究发现,鼠李糖乳杆菌MLGA、热灭活鼠李糖乳杆菌MLGA及其细胞壁组分细胞壁完整肽聚糖均能不同程度地提高TLR2mRNA的表达。特异性抗体封闭TLR2后,各组的AvBD9mRNA表达水平均出现不同程度的下降,其中以肽聚糖刺激组下降幅度最大。EMSA实验结果发现,鼠李糖乳杆菌MLGA、热灭活鼠李糖乳杆菌MLGA及其细胞壁组分完整肽聚糖刺激上皮细胞后引起NF-κB

(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells)和AP-1(activator protein1)核转录因子活性的增加,其中肽聚糖组为强阳性。MAPK (mitogen-activated http://www.selleck.cn/products/Metformin-hydrochloride(Glucophage).html protein kinase kinase)信号通路分子之-c-Jun N-terminal kinase (JNK)的特异性抑制剂SP600125和NF-κB特异性抑制剂PDTC预处理上皮细胞均阻断或降低鼠李糖乳杆菌MLGA、热灭活鼠李糖乳杆菌MLGA及其细胞壁组分完整肽聚糖诱导的AvBD9基因表达,且PDTC抑制AvBD9基因表达的幅度大于SP600125。鼠李糖乳杆菌MLGA、热灭活鼠李糖乳杆菌MLGA及其细胞壁组分完整肽聚糖通过TLR2-NF-κB/AP-1信号通路介导诱导上皮细胞AvBD9的表达,且以TLR2-NF-κB为主要信号转导途径。
目的：

研究天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞的保护作用及其相关机制。 方法： 采用谷氨酸建立PC12细胞损伤模型，MTT比色法测定细胞活力并确立谷氨酸最佳造模浓度。采用倒置显微镜观察细胞形态变化；MTT法检测细胞活力；AO/EB双染法和Hoechst荧光染色法观察细胞凋亡形态；流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）的变化以及Annexin V/PI染色后细胞凋亡率；罗丹明123染色法检测线粒体跨膜电位；Western blotting法分析p-p38，p-ERK1/2及caspase-3蛋白的表达。 结果： 1. MTT法结果表明，谷氨酸15mmol/L作用PC12细胞24h，细胞生长抑制率接近50%，选择此浓度造模。 2. MTT法结果显示，天麻素给药72h后，与谷氨酸模型组比较，各天麻素组对损伤的PC12细胞均呈现一定的保护作用；细胞形态学观察结果显示，天麻素组的细胞损伤程度减轻。 3. AO/EB染色结果显示正常组细胞形态规则，大部分细胞经AO染色成均匀一致的绿色，模型组细胞呈现橘红色荧光，天麻素给药组的细胞与模型组相比被EB染成橘红色的细胞数量较少。 4. Hoechst33258荧光染色结果显示谷氨酸模型组细胞，多数细胞核呈现蓝白色、碎块状致密浓染，呈现典型的凋亡细胞核特征；而天麻素处理后呈现凋亡特征的细胞数量减少。 5.流式细胞仪检测结果表明，天麻素给药组可明显抑制谷氨酸引起的ROS的累积；Annexin V/PI双染结果表明天麻素在一定程度上能够降低谷氨酸诱导的PC12细胞的凋亡率；罗丹明123染色结果显示天麻素给药组线粒体膜电位升高，线粒体损伤程度减轻。 6.