1在线软件对WWP1的结构及其相互作用的蛋白进行预测分析。(6)统计学处理：采用统计学软件SPSS17.0分析所有的实验数据,数据表示为x±S,采用单因素方差分析(One JQ1细胞系 way ANOVA)比较多个样本的均数,以P0.05)。WWP1 siRNA组中MKN-45和AGS的总凋亡率分别为22.95±1.92%和36.2±4.36%,显著高于未处理组(8.38±1.03%和11.49±0.48%)和对照siRNA组(9.9±1.29%和11.48±0.88%),且差异具有统计学意义(F=90.441和91.844,均P=0.000),而未处理组和对照siRNA组之间MKN-45和AGS细胞的总凋亡率无差异(P＞0.05)。(6)

WWP1 siRNA组中MKN-45和AGS的CDK4、cyclin D1和Bcl-2蛋白表达水平显著低于对照siRNA组和未处理组,而Bax蛋白的表达和Caspase-3的活性均显著高于对照siRNA组和未处理组,差异具有统计学意义(P0.05)。(4) Kaplan-Meier存活曲线分析结果显示,与未处理的MKN-45和对照siRNA组相比,WWP1 siRNA组中裸鼠的生存时间显著延长(P
RecQL4是人类RecQ解旋酶家族中的一员,具有打开DNA双链的功能,能够参与DNA复制,转录及DNA损伤修复途径。已有研究报道RecQL4在多种肿瘤中都异常高表达,揭示其可能与肿瘤的发生和发展密切相关。本研究中,我们证明了RecQL4在调控胃癌对顺铂的耐药性中发挥重要作用。我们检测了20例人类胃癌临床样本中RecQL4的mRNA水平,发现其中15例(75%)mRNA的水平比对照组升高2.5倍以上,与此一致的是,在所检测的11例人类胃癌临床样本中,有8例(72.2%)RecQL4的蛋白水平比对照组异常升高。而且在对92例人类胃癌样本免疫组化分析发现,有74例(80.4%)都呈现出了异常高的RecQL4蛋白水平。引人注目的是,RecQL4表达相对较高的胃癌病人生存和预后较差,同时RecQL4表达相对较高的胃癌细胞对顺铂有较高的耐药性。随后通过一系列生化实验我们揭示了RecQL4在调控耐药性方面的新功能,即RecQL4可通过AKT介导转录因子YB1的磷酸化而使其活化,活化的p-YB1在细胞核中积累并结合到多药耐药基因MDR1的启动子区调控该基因的表达。在内源RecQL4表达相对较低的顺铂敏感型胃癌细胞中过表达RecQL4,可以提升这些细胞中p-YB1和MDR1的水平,进而增强这些细胞对顺铂的耐药性；反之在内源RecQL4表达相对较高的顺铂耐受型胃癌细胞中抑制RecQL4的表达,不仅能够降低这些细胞中p-YB1和MDRl的水平,而且能够增强其对顺铂的敏感性。因此,我们的结果充分说明了RecQL4可做为癌症化疗中一个潜在的应用靶点,同时揭示了RecQL4-AKT-YB1-MDR1这一调节轴心在胃癌对顺铂耐药性机制中发挥了重要作用。
第一部分普拉克索诱导大鼠低体温的研究目的:研究普拉克索是否具有降温作用以及不同剂量的普拉克索诱导大鼠低体温的效果。方法:将42只成年健康雄性SD大鼠随机分为7组,每组6只,分别接受0

Target Selective Inhibitor Library 那个 mg/kg,0.125 mg/kg,0.25 mg/kg,0.5 mg/kg,1.0 mg/kg,1.5 mg/kg和2.0 mg/kg体重的普拉克索腹腔注射,持续监测大鼠体温变化,选择合适的药物浓度。结果:1.持续动物体温检测显示,与0.125 mg/kg体重相比,0.25 mg/kg体重的普拉克索可以更稳定地维持大鼠体温在34~36℃,给药间隔时间为8 h。2.与0.25mg/kg体重组死亡率(0%)相比,0.5 mg,1.0 mg,1.5 mg,2.0 mg/kg体重组均出现不同程度死亡。结论:1.多巴胺受体激动剂普拉克索可以诱导大鼠产生低体温;2.0.25 mg/kg体重的普拉克索可以安全有效地诱导大鼠体温在34~36℃之间第二部分普拉克索诱导的低体温对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的抑制作用目的:研究普拉克索诱导的低体温对蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤(EBI)的影响。方法:将30只成年雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、SAH组以及SAH+普拉克索,SAH+普拉克索+复温组等5组,每组6只。所有SAH大鼠经自体股动脉抽取非肝素化动脉血注入视交叉前池,致SAH模型,在SAH后48h处死大鼠。假手术组大鼠进行股动脉采血并予颅骨钻孔,但未进行注血,于处理后48h处死大鼠。此外,普拉克索处理:在SAH建模后立即接受0.25

mg/kg体重的普拉克索腹腔注射。复温处理:进行普拉克索腹腔注射后通过加热毯维持大鼠体温在37℃。各组大鼠均接受持续体温监测。建模后48h,大鼠安乐死,取材。首先通过TUNEL染色方法检测脑细胞的凋亡情况;通过western blot检测脑组织中的白蛋白含量(即白蛋白泄露)分析血脑屏障的完整性;通过行为学评分评估行为能力;分析在SAH条件下,普拉克索是否可以诱导体低温,以及普拉克索对SAH引起的早期脑损伤的影响。其次,对SAH组,SAH+普拉克索以及SAH+普拉克索+复温组进行血脑屏障完整性和行为能力评估,分析普拉克索是否通过诱导低体温发挥作用。综上分析,在SAH条件下,普拉克索对SAH引起的早期脑损伤的影响,普拉克索是否通过诱导体低温发挥作用。结果:1.持续动物体温检测显示,在SAH条件下,腹腔注射0.25 mg/kg体重的普拉克索可以稳定地维持大鼠体温在34~36℃,给药间隔时间为8 h。2.TUNEL染色结果显示,正常组和假手术组中仅出现少量的TUNEL阳性细胞;与假手术组相比,SAH组TUNEL阳性细胞数量极其显著的增多,而普拉克索诱导的低体温可以有效地降低SAH引起的TUNEL阳性细胞数量增多。3.