宫颈癌组织中gsk3β、p-gsk3βser9和p-gsk3βtyr216表达阳性率分别为18.8%、68.8%和12.5%。早期宫颈癌患者中gsk3β和p-gsk3βtyr216表达显著高于中晚期宫颈癌患者(25.5%vs.4.0%,χ2=5.193,p=0.029;76.4%vs.52.0%,χ2=4.749,p=0.039),早期宫颈癌患者中p-gsk3βser9表达显著低于中晚期宫颈癌患者(5.5%vs.28.0%,χ2=7.988,p=0.009)。在宫颈癌组织中随着细胞学分级的降低,p-gsk3βser9阳性率也随之升高(7.4%、7.9%和33.3%,χ2=7.329,p=0.031)。淋巴结转移阳性的宫颈癌患者中gsk3β和p-gsk3βtyr216表达均显著低于淋巴结转移阴性的宫颈癌患者(5.9%vs.28.3%,χ2=6.427,p=0.018;52.9%vs.80.4%,χ2=6.878,p=0.014),p-GSK3βser9在淋巴结转移阳性的宫颈癌患者中表达显著高于淋巴结转移阴性的宫颈癌患者(23.5%vs.4.3%,χ2=6.577,p=0.015)。HPV阳性表达与GSK3β阳性表达呈负相关(相关系数R=-0.392,p=0.001),与p-GSK3βtyr216阳性表达呈正相关(相关系数R=0.275,p=0.026),与p-GSK3βser9阳性表达无相关性。2.HPV

PFI-2体外 E7可显著增加宫颈鳞癌C33A细胞S期比例,提示HPV E7可促进宫颈癌细胞DNA的复制,从而导致肿瘤细胞的恶性转化。HPV E6、E7过表达可显著增强C33A细胞侵袭迁移能力及增殖能力,并且HPV selleck化学药品液面控制 E6、E7两者之间有协同作用。3.HPV E6、E7在较短时间(24h内)可通过GSK3β蛋白磷酸化激活,HPV E6、E7联合对于激活GSK3β蛋白磷酸化具有协同作用。HPV E6、E7通过激活GSK3β蛋白磷酸化发挥对GSK3β下游靶基因CyclinD1、β-catenin基因的调控作用。综上所述,我们初步证实:HPV E6、E7通过激活GSK3β蛋白磷酸化发挥对GSK3β下游靶基因CyclinD1、β-catenin基因的调控作用,从而促进了宫颈癌细胞的侵袭、迁移、增殖能力,导致恶性生物学行为。
目的乳腺癌是严重威胁妇女身心健康的恶性肿瘤之一,其发病率在国内呈逐年上升趋势,虽然近年来针对乳腺癌发病分子水平的研究比较深入,发现了多种因子及信号通路参与了乳腺癌的发生发展,但其发病机制仍然不清楚,针对乳腺癌相关分子的研究,仍是当前研究的重要课题。葡萄糖调节蛋白94(glucose

regulated protein, GRP94),是主要贮存于内质网的分子伴侣,与HSP90有50%的同源性,参与内质网应激反应,同时也是未折叠蛋白反应下游关键分子,研究发现GRP94在结肠癌,胰腺癌,食管癌,乳腺癌等多种肿瘤中高表达,且参与了肿瘤的发生与发展,而其相关机制的研究是当前的热点之一。本课题在细胞水平检测了GRP94在乳腺癌细胞中的表达,同时在乳腺癌MCF7细胞中采用RNAi技术靶向下调GRP94表达,观察沉默GRP94对乳腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭迁移的影响并探讨其可能机制,有助于发现GRP94与乳腺癌发生发展之间的关系,为寻找新的乳腺癌治疗靶点、乳腺癌的预防与治疗提供理论依据。Wnt/β-catenin信号通路的众多成员都参与了乳腺癌的发生与发展过程,研究发现Wnt信号在乳腺癌中异常活跃,且协同TGFp信号通路参与调节肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭迁移等重要过程,本研究通过沉默GRP94表达,进一步探讨GRP94与Wnt/β-catenin信号通路之间的联系,进而阐释GRP94在乳腺癌发生发展过程中的重要作用。方法1.

Real-time PCR、Western blot分别在mRNA与蛋白水平检测GRP94在乳腺上皮细胞MCF10A、乳腺癌MCF7、MDA-MB-231、BT474及SK-BR-3细胞株中的表达。2.采用RNAi靶向沉默技术,在乳腺癌MCF7细胞株中沉默GRP94基因表达,观察其对MCF7细胞增殖、凋亡及侵袭迁移的影响,并通过Western Doxorubicin小白鼠 blot分别检测相关分子的表达。3.Western blot检测Wnt/p-catenin信号通路关键分子及相关靶基因的表达。结果1.GRP94在乳腺癌细胞中表达显著增高,且在MCF7细胞中表达最高(P
丝素蛋白(SF)是一种综合性能优良的天然生物材料,通过电纺技术将SF制备成超细纤维实现对天然细胞外基质(ECM)的超微结构仿生是当前骨组织工程(BTE)研究领域的热点之一。电纺SF纤维结合具有再生特性的干细胞将有利于提高BTE方法修复骨缺损的再生功效,这需要提高支架的成骨诱导分化性能。Purmorphamine(PM)是一种新型的嘌呤衍生类小分子药物,具有优良的骨生成诱导活性。本论文主要目的是基于电纺SF仿生纤维,探讨引入PM后SF基纤维的成骨诱导分化功效。为了检测SF本身是否具有成骨诱导能力,本研究首先采用Na2CO3脱胶法从蚕茧中提取SF以及全骨髓贴壁法从大鼠体内提取骨髓间充质干细胞(BMSCs),并对提取的SF和BMSCs进行分析鉴定,然后配制含不同SF浓度(0.01%、0.05%和0.1%)的培养基并对BMSCs进行培养,体外检测这些SF溶液对BMSCs生长、增殖和成骨分化的影响。结果表明:1)蚕茧提取样品的FTIR光谱图在1653、1530.5和1212.

11%,通过红外光谱分析钒酸根可能与壳寡糖分子的氨基和羟基发生反应。为了进一步探讨壳寡糖螯合钒的降糖作用,选择昆明种雄性小白鼠进行动物实验,研究了壳寡糖螯合钒对糖尿病小鼠的降糖功能及其对肝脏、肾脏和脾脏的损伤和修复的影响。在饲料中添加0.7g/kg的壳寡糖和壳寡糖螯合钒,通过4周的动物实验,结果表明,糖尿病对照组小鼠实验开始后体重逐渐下降,实验结束时,小鼠的体重下降了1.91g,比正常对照组下降了29.69%。壳寡糖组和壳寡糖螯合钒组在实验开始后前两周体重下降,从第三周开始体重增加,实验结束时与糖尿病对照组相比增加了17.57%和27.99%,差异性显著(P<0.05)。摄食量和饮水量的结果表明,糖尿病组的摄食量和饮水量一直是增加的趋势,壳寡糖组和壳寡糖螯合钒组的摄食量和饮水量从第二周开始下降,实验结束时,壳寡糖组的摄食量(19.62g)比糖尿病对照组(32.44g)降低了39.52%,壳寡糖螯合钒组的摄食量(18.85g)比糖尿病对照组(32.44g)降低了41.89%,差异性显著(P0.05)。在血糖方面,糖尿病对照组的血糖一直增加,实验结束时与正常对照组相比有显著性差异(P0.05)。从肝脏、肾脏和脾脏的形态学实验中发现,糖尿病对照组的肝脏、肾脏和脾脏都出现了肿大,颜色加深等现象,损伤严重,而壳寡糖组和壳寡糖螯合钒组的肝脏、肾脏和脾脏的损伤较小,修复效果明显。
本试验的研究目的是探讨宰前日粮中添加阿魏酸(FA)和维生素E(VE)对育肥猪的肉品质、抗氧化性能的影响。分析阿魏酸和维生素E是否通过提高机体的抗氧化性能,进而改善肉品品质。另外,通过对核因子相关因子-2(Nrf2-ARE)信号通路相关靶基因的mRNA表达和蛋白表达的研究,揭示阿魏酸和维生素E可能的提高机体抗氧化能力的作用机制,同时分析阿魏酸和维生素E的联合添加是否存在互作效应,为阿魏酸和维生素E在养猪业上的研究应用提供科学的理论依据。本试验分为三部分：

点击此处 第一部分主要研究阿魏酸和维生素E对育肥猪肉品质的影响。试验选取60头健康的阉公猪随机分为4个处理组,即基础日粮对照组、在基础日粮基础上添加100mg/kgFA组、400mg/kg VE组、100mg/kg FA+400mg/kg VE组,试验期为28d。饲养试验结束后,每组随机选取6头猪进行屠宰,采样进行指标测定。试验结果显示：与对照组相比,FA组和VE组的剪切力值显著下降(P<0.05),且VE组的眼肌面积显著增加(P<0.05),FA+VE组的蒸煮损失和肌苷酸(IMP)含量显著下降(P<0.05),眼肌面积则极显著增加(P0.05)；相比于对照组和FA组,VE组和FA+VE组血浆、肝脏、肌肉中的VE含量均极显著升高(P<0.01)；VE组则极显著升高了宰后45min肉色红度a*值(P<0.01,P<0.05),并显著减少了冷藏4d时猪肉中的MDA含量(P<0.01),并显著减少了冷藏4d时猪肉中的MDA含量(P<0.05)；与对照组相比,FA组肝脏中的MDA含量显著下降(P<0.01),MDA含量极显著下降(P<0.01),FA+VE组肝脏中的GPx酶活性极显著增加(P
中国卤虫(Artemia

sinica)广泛分布于高盐水域中。盐度、温度以及溶解氧都是卤虫生存的重要环境因子。卤虫具有较强的抵抗极端环境的能力,并且在高盐、低温等条件下,可产出休眠卵来应对长期恶劣的环境。 NURP1(Nuclear Protein1)是重要的小分子应激相关蛋白,在卤虫滞育方面发挥重要的作用,具有复杂的表达调节方式和多种细胞功能。但对nurp1在中国卤虫胚胎发育过程中的基因表达模式及其在抗逆方面的研究还未见报道,有待于进一步深入细致的研究和分析。 本研究采用RACE技术对中国卤虫As-nupr1基因进行克隆,得到了568bp的As-nupr1基因序列全长。As-nupr1cDNA包含198bp的开放阅读框,42bp的5’非编码区和328bp的3’非编码区。使用ClustalX2.0和MEGA4.0软件对推测的氨基酸序列和相近蛋白的氨基酸序列进行分子进化分析,使用在线分析软件对As-nupr1基因的推测蛋白的氨基酸序列进行了分析。该NURP1推测蛋白包含66个氨基酸,含有bHLH结构域和一个核定位序列,分子量为7.9kD,理论等电点为10.34。NURP1在长期进化过程中比较保守。 可能 采用原位杂交技术对As-nupr1在中国卤虫胚胎发育过程中的表达部位进行研究,实验结果显示As-nupr1在中国卤虫胚胎发育各个时期及虫体各个部位表达广泛。 采用实时荧光定量PCR技术对As-nupr1在中国卤虫不同胚胎发育时期、温度和盐度胁迫实验中的表达量进行了研究。发现As-nupr1在中国卤虫胚胎发育的各时期均有表达,但相对表达量不同。其中从卵囊收集到的胚胎的表达量比滞育后恢复胚胎发育的胚胎中表达量高。在随后的发育中As-nupr1的表达量先呈显著下降趋势,在发育至无节幼体阶段后才呈现逐渐上升趋势。在温度和盐度胁迫实验中,随着盐度的升高、温度的降低,As-nupr1基因的表达量也呈逐渐升高的趋势。这些发现表明As-nurp1在对卤虫克服外界不利环境胁迫时发挥了重要的作用,是卤虫中重要的抗逆基因,也是中国卤虫胚胎发育过程中的重要调控基因,是重要的胚胎保护因子。研究As-nupr1基因在卤虫胚胎发育和抗逆过程的表达对研究卤虫滞育的分子机制具有重要的理论意义,同时对进一步开发利用卤虫资源具有一定的应用价值。
目的：水体富营养化导致蓝藻水华频繁发生。蓝藻水华不仅严重降低水体利用价值，而且很多蓝藻（主要是铜绿微囊藻）还能产生毒素——微囊藻毒素（Microcystin,

DAPT溶解度 MC），对人类健康构成威胁，其中存在较多、毒性较大的是微囊藻毒素LR（Microcystin-LR, MC-LR）和RR。同位素示踪发现MC进入动物体内后主要分布在肝脏，提示肝脏可能是它的主要靶器官，可引起肝细胞损伤、原发性肝癌、肝细胞肿胀和坏死。MC肝脏毒性的分子机制到目前为止已有了比较广泛的研究，也取得了一定的研究成果，但其具体机制仍存在很多疑问，尤其是细胞骨架在MC毒性效应中的作用。因此，我们选择正常人来源的肝细胞系HL7702作为研究对象来研究细胞骨架中微丝参与MC-LR的具体毒性机理。 方法：1、用MTT法检测MC-LR对HL7702细胞增殖的影响，不同浓度的MC-LR（0-10μM）染毒处理HL7702细胞。然后，根据MTT结果确定后续实验的染毒浓度。 2、用微丝特异染色剂荧光标记的鬼笔环肽对细胞进行染色，在激光共聚焦显微镜下观察其形态的变化。 3、再用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分析微丝相关基因转录、翻译和磷酸化水平的变化，以及MAPK信号通路在此过程中的作用。 结果：1、不同浓度MC-LR（0、0.001、0.

05);6nM和12nM TL处理组穿过人工基底膜的细胞数均无明显变化(P均＞0.05); 6.18 nM TL处理HT-1080细胞72小时后,MMP-9基因甲基化水平明显上调(P＜0.05);6nM和12 nM TL处理组MMP-9基因甲基化水平均无明显变化(P均＞0.05); 7.18 nM TL处理HT-1080细胞72小时后,DNMT-1和-3A mRNA及蛋白表达明显上调(P均＜0.05),DNMT-3B mRNA及蛋白表达无明显变化(P＞0.05);6nM和12nM TL处理组DNMT-1、-3A和-3BmRNA及蛋白表达均无明显变化(P均＞0.05)。

BIBF 1120研究购买 结论 1.TL抑制HT-1080细胞的增殖; 2.TL可能通过抑制MMP-9的表达及活性而抑制肿瘤细胞体外侵袭能力; 3.首次证实TL上调MMP-9基因甲基化水平; 4.首次证实TL上调DNMT-1和-3A的表达。
目的:探讨针刺对脑出血急性期脑损伤及脑水肿拮抗作用的机理。本课题通过观察“百会”透“曲鬓”头针疗法对急性脑出血大鼠脑组织形态学及脑组织中GDNF、MMP-9、AQP-4和VEGF表达的影响来揭示对脑损伤及脑水肿拮抗作用的相关机理,为治疗急性脑出血的临床方法奠定实验基础。

方法:选取健康雄性Wistar大鼠320只(其中160只大鼠用于光镜、电镜、原位杂交和免疫组化测定,另160只大鼠只用于检测脑水含量),随机分为三组:模型组、针刺组、西药组,每组100只大鼠;每组再随机分为6h、1d、2d、3d、7d五个亚组,每个亚组20只大鼠;制备脑出血模型;另设20只正常大鼠作为空白组。针刺组大鼠针刺患侧“百会”透“曲鬓”穴。在光镜和电镜下观察各组大鼠脑组织形态学改变;应用干-湿重法测定各组大鼠脑水含量;运用原位杂交及免疫组化等方法检测各组大鼠脑组织中GDNF、MMP-9、AQP-4和VEGF阳性细胞的表达。 和 结果:1.光镜下可见模型组血肿周围脑组织坏死、水肿、炎性细胞浸润,神经细胞核固缩、空泡化,毛细血管扩张、充血,3天时最严重。针刺组脑组织逐渐修复,水肿程度较轻,炎性细胞减少。西药组与模型组比较,改变不显著。2.电镜下可见模型组神经细胞肿胀,染色质凝聚成块状或核成溶解状,线粒体肿胀、空泡化,嵴断裂,粗面内质网扩张,多聚核糖体解聚,突触结构肿胀。针刺组较模型组神经细胞肿胀减轻,线粒体结构破坏较轻,突触结构较清晰。西药组与模型组比较,改变不显著。3.各造模组大鼠术后均出现不同程度的脑水肿现象。模型组大鼠术后6h出现轻度脑水肿现象;3d脑水肿达高峰;7d仍有轻度脑水肿现象。针刺组较模型组和西药组脑水肿程度减轻,与模型组比较在1d-7d时差异明显(P＜0.01);与西药组比较在1d-3d时差异明显(P＜0.01)。西药组较模型组脑水肿程度减轻,在1d-3d时差异明显(P＜0.01)。4.GDNF原位杂交方法检测结果:各造模组大鼠术后均出现不同程度的GDNFmRNA阳性表达增多现象。模型组大鼠术后6h即出现较明显的GDNFmRNA阳性细胞表达增多现象;1d时达高峰;2d时呈现下降趋势;7d时接近正常。针刺组GDNF的表达明显高于模型组和西药组,在相同时间点差异均有统计学意义(P＜0.01),7d时仍有很高表达。西药组与模型组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。5.MMP-9免疫组化方法检测结果:各造模组大鼠术后均出现不同程度的MMP-9阳性细胞表达增多现象。模型组大鼠术后6h即出现明显的MMP-9表达增加;2d时达高峰;3d时出现缓慢下降;7d时MMP-9表达仍高于空白组。针刺组MMP-9阳性细胞表达低于模型组和西药组,与模型组比较在相同时间点均差异明显(P＜0.01);与西药组比较在6h-2d时差异明显(P＜0.01)。西药组MMP-9表达在1d-7d时低于模型组(P＜0.01)。6.AQP-4免疫组化方法检测结果:各造模组大鼠术后均出现不同程度的AQP-4阳性表达上升现象。模型组大鼠术后6h即出现AQP-4阳性细胞表达增多;3d时达高峰7d时仍高于空白组。针刺组AQP-4表达低于模型组和西药组,在1d-3d时差异明显(P＜0.01)。西药组与模型组比较,2d时稍有差异(P＜0.05)。7.VEGF免疫组化方法检测结果:各造模组大鼠术后均出现不同程度的VEGF阳性表达增多现象。模型组大鼠术后6h即出现大量的VEGF阳性细胞表达并出现第一个高峰;1d、2d出现缓慢下降态势;3d突然增高并达峰值;7d时阳性表达仍高于空白组。在1d-3d时间点,针刺组VEGF的表达明显低于模型组(P＜0.01);在7d时间点,针刺组VEGF阳性表达反而较模型组明显增多(P＜0.01)。西药组与模型组比较,在7d时较模型组增多明显(P＜0.01)。

获悉更多 结论:1.“百会”透“曲鬓”头针疗法在脑出血急性期能明显减轻神经细胞损伤及超微结构的破坏、减少炎性细胞浸润、降低血肿周围脑组织脑水肿程度,提示对脑组织损伤及脑水肿有拮抗作用。2.

9%、13.8%及23.9%。BMI越高,年龄越大糖尿病、高血压患病的相对危险度越高。 (二) 动物模型研究: 1. MS组体重、Lee’s指数和腹围显著高于对照组,表现出腹型肥胖体型。 2. MS组大鼠的WAT重量、VAT总量及其内脏脂肪系数均显著高于对照组,各部位WAT细胞的面积、大脂肪细胞数量均明显高于对照组。 3. MS组大鼠血压、FINS、LDL和TG、FFA均明显高于对照组。 病理切片可见,MS组大鼠BAT结构松散;棕色脂肪细胞内脂滴增大、增多。肝组织,部分肝细胞脂肪变性,肝板结构消失。

(三) 分子生物学实验: 1. MS肥胖大鼠脂肪组织中AGT mRNA的表达:皮下脂肪组织(Sub)中AGT mRNA的表达明显低于对照组,而BAT、VAT中AGT mRNA的表达均显著高于对照组。 2. MS肥胖大鼠脂肪组织中肾素mRNA的表达:BAT中mRNA的表达明显低于对照组而Sub中mRNA的表达显著高于对照组,VAT中与对照组无显著性差异。 3. MS肥胖大鼠脂肪组织中ACE mRNA的表达:在Sub中表达明显低于对照组,而BAT和VAT中ACE mRNA的表达均显著高于对照组。 4. MS肥胖大鼠脂肪组织中AT1 mRNA和蛋白表达:在BAT中AT1 mRNA和蛋白表达明显低于对照组,VAT中AT1 http://www.selleckchem.cn/products/gsk1120212-jtp-74057.html mRNA和蛋白表达均显著高于对照组,而Sub中AT1 mRNA的表达高于对照组,AT1蛋白的表达与对照组无显著性差异。 5. MS肥胖大鼠脂肪组织中ACE2及AT2 mRNA的表达:在MS肥胖大鼠和对照组大鼠中,各部位脂肪组织均未发现ACE2及AT2 AZD2281 mRNA的表达。 6. MS肥胖大鼠脂肪?
从我们的大规模cDNA克隆和测序计划中,利用表达谱基因芯片筛选的结果并通过生物信息学分析,我们选取了2条基因进行进一步的研究,以探讨这些基因的功能。 外界刺激通过细胞内的蛋白激酶反应链,将信号从细胞膜传导到核,导致相关转录因子的磷酸化和被激活,从而引起基因表达的变化。cAMP反应元件结合蛋白(cAMP-responsive element binding protein,CREB)也许是其中最具特点的刺激诱导转录因子我们实验室克隆了一个人类CREB的新基因(CREB4),该基因编码一个395个氨基酸的蛋白,并与小鼠的CREB3高度同源。RT-PCR显示CREB4在胰腺、前列腺、脑和骨骼肌组织中表达,在小肠、外周血白细胞、睾丸和胸腺组织中低表达,而在成人胎盘、心脏、脾脏、卵巢、肾脏、肝脏、肺和结肠组织中未检测到特异性条带,在检测的各肿瘤组织中显示CREB4基因只在结肠癌

(CX-1和GI-112)、肺癌(LX-1)、前列腺癌(PC-3)和胰腺癌(GI-103)有表达,而在乳腺癌(GI-101)、卵巢癌组织(GI-102)和肺癌组织(GI-117)中未测到特异性条带。通过生物信息学将CREB4定位于人染色体1q21.3。表达谱芯片结果显示CREB4基因在肝癌组织上调。GFP荧光定位显示全长CREB4定位与细胞质内,而去C端的突变体定位与细胞核。采用酵母双杂交系统以寻找与CREB4相互作用的蛋白。我们发现CREB4可以与核孔复合物相关蛋白TPR及kayopherinα2相互作用,而这两个蛋白都与蛋白质的核转运有关,推测CREB4可能通过它们进入细胞核。 蛋白4.1是红细胞中以血影蛋白(spectrin)为基础的细胞膜骨架的一个基本成分,在维持红细胞质膜的形态和机械性能方面起着至关重要的作用。我们克隆了一个新的蛋白4.1基因(4.1O)。该基因全长2312bp,编码一个553氨基酸的蛋白。RT-PCR显示4.1O只在

卵巢组织中检测到特异性条带,在胎胸腺组织和胎脑组织中低表达。生物信息学分析显示4.1O含有14个外显子和13个内含子,定位于人染色体9q21-9q22区段上。表达谱芯片结果提示4.1O基因在肝癌组织和胃癌组织中表达上调。
第一部分 哪里 榄香烯在喉癌化疗中作用机制的体外研究 目的:探讨榄香烯对人喉鳞癌细胞株 HEp-2 细胞和 AMC-HN-8 细胞的抑制作用; 以及与凋亡相关的 Caspase-3 活性的改变;探讨榄香烯抑制人喉癌细胞株过程中 真核细胞翻译起始因子 eIF 家族成员(eIF4E、eIF4G)与肿瘤新生血管有关的 bFGF、VEGF 的表达情况。方法:使用 MTT 法和流式细胞分析技术(FCM), 研究榄香烯诱导人喉癌细胞株凋亡的作用;并使用比色法,研究榄香烯诱导人喉 鳞癌细胞株凋亡时 Caspase-3 活性的变化;以及使用 Westernblot 和 RT-PCR 法检 测榄香烯作用的人喉癌细胞株中 eIF4E、eIF4G、bFGF、VEGF 在 mRNA 和蛋白 水平的表达。结果:榄香烯抑制人喉癌细胞株 HEp-2 细胞和 AMC-HN-8 细胞有 时间剂量依赖性(HEp-2 细胞 24 小时 IC50值为 69.297μg/ml,AMC-HN-8 细胞 24 小时 IC50值为 70.

内膜癌组患者uPA、uPAR、P38的阳性表达率分别为58%、56%、54%,内膜增生组uPA、uPAR、P38的阳性表达率分别为20%、25%、25%,对照组的uPA、uPAR、P38的阳性表达率分别为8.3%、16.7%、0%；三组中内膜癌组织中uPA、uPAR、P38的含量最高,统计学分析显示：与内膜增生组及对照组比较,差别均有显著性(P0.05)。2.在子宫内膜癌组织中uPA、uPAR和P38的含量与临床病理特征关系统计显示：①Ⅲ-ⅣV期较Ⅰ～Ⅱ期阳性表达率高(x2分别为4.258、8.179、5.832)；②低分化癌组织较高中分化组织高(x2分别为5.109、9.399、6.629)；③肌层浸润深度≤1/2较浸润深度>1/2低(x2分别为5.221、9.475、7.034)；④有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(x2分别为9.805、10.464、11.15)；以上差别均有显著性(P均0.05)。3.子宫内膜癌组织uPA表达率的增高伴有uPAR及P38表达率的增高,uPA与uPAR、uPA与P38的表达均呈正相关(r分别为0.389、0.353,(P均<0.05)。结论：uPA与uPAR协同促进了子宫内膜癌的发展、转移,p38信号通路在此过程中可能参与调节uPA,促进癌细胞的浸润转移,因此uPA、uPAR、p38可能成为推测子宫内膜癌预后的重要参考指标。
目的：观察血小板反应蛋白-1(TSP-1)、色素上皮衍生因子(PEDF)在糖尿病鼠肾组织中的表达变化,并探讨Angiopoietin-1对这些因子的影响。

很少 方法：构建并鉴定高效表达Ang-1腺病毒载体,用链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病肾病模型。设四组,即正常对照组、糖尿病组、空白载体组、Ang-1治疗组、成模8周后尾静脉注射Ang-1腺病毒载体。分别于8、12、20、28周行尿蛋白、肾脏常规病理检测,采用免疫组化、实时定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)方法,分别检测肾组织中TSP-1、PEDF蛋白及mRNA表达水平,并行相关分析。 时间 结果：(1)三个模型组尿蛋白均明显升高(P0.05)；三个模型组12周后肾组织TSP-1蛋白和mRNA表达上调(P<0.05),峰值在20周；Ang-1治疗组肾组织TSP-1蛋白和mRNA表达低于糖尿病组和空白载体组(P<0.05)。(3)PEDF主要表达于肾小球和或小管间质；正常对照组肾组织PEDF蛋白和mRNA表达差异不显著：三个模型组各时点12周后肾组织PEDF蛋白和mRNA表达明显下调(P<0.05),且呈递减趋势；Ang-1治疗组肾组织PEDF蛋白和mRNA表达高于糖尿病组和空白载体组(P
目的：探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(Neutrophil Elastase, NE)在大鼠重度脑损伤误吸致急性肺损伤早期的表达与变化,为重度脑损伤误吸患者急性肺损伤发病机制的研究和临床防治提供理论依据。

方法：①采用改进型Marmarou法建立大鼠重度脑损伤模型。②80只脑损伤模型大鼠随机分为重度脑损伤组(SB组,n=40)和重度脑损伤误吸组(SA组,n=40)。SA组大鼠在脑损伤后经气管滴入胃液(0.4ml/kg, pH=1.2)制成脑损伤误吸模型。SB组(又分为SB1、SB2、SB4、SB6组,每组10只)与SA组(又分为SA1、SA、SA4、SA6组,每组10只)分别于造模成功后1h、2h、4h、6h处死大鼠,进行有关指标观察和检测。对照组(C组,n=10)不给予任何损伤处理。③应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)和血浆NE的含量；Real-time 所以 RT-PCR法测定肺组织NEmRNA的表达；免疫透射比浊法测定BALF中白蛋白浓度；称取肺组织的湿重、干重计算湿重／干重比；光镜、电镜观察肺组织形态学改变。④用SPSS13.0软件分析所得数据。 结果：①雄性SD大鼠170只(含对照组10只),制作脑损伤模型过程中死亡73只,成功制作脑损伤模型87只,死亡率为45.63%;制作误吸模型过程中,SA组共死亡8只,SA1、SA2、SA4、SA6组分别存活8、8、9、7只大鼠。②大鼠脑损伤后立即出现呼吸抑制,数秒至数分钟后自行恢复呼吸,随后出现呼吸急促,伴全身抽搐、口唇及四肢发绀、偏瘫、口鼻见泡沫样血性分泌物等表现。大鼠昏迷期间,角膜反射及翻正反射等生理指标消失。胃液滴入气管后,大鼠出现呛咳、烦躁、呼吸困难等症状。③肉眼观察脑组织见出血及水肿；光镜显示蛛网膜下腔及脑实质出血、脑血管扩张充血、组织疏松、神经细胞水肿等。④肉眼观察C组大鼠肺组织无充血、水肿、出血及梗死灶,SB、SA组肺组织不同程度充血、水肿,表面可见点、片状出血,挤压时可见粉红色泡沫状液体溢出；光镜观察SB、SA组肺组织均可见肺泡壁毛细血管扩张充血,肺泡腔内不同程度水肿液积聚伴出血,肺间质水肿、肺泡间隔增宽伴中性粒细胞浸润；电镜显示SB、SA组肺泡Ⅰ型上皮细胞及线粒体肿胀,胞核染色质边集、固缩甚至消失；肺泡Ⅱ型上皮细胞胞核变形,线粒体及板层小体呈空泡样变,绒毛变形、脱落。⑤SB、sA组BALF、血浆及肺组织NE水平均较C组明显升高(P<0.01),NE浓度随时间发展逐步增高；SA组不同时相点NE水平较SB组相应时相点明显升高(p<0.01)。⑥SB2～SB6、SA1～SA6组BALF中白蛋白浓度与C组比较明显升高(P<0.01),且随时间延长呈上升趋势；SA组各时相点白蛋白浓度较SB组同时相点明显增加(p0.05)；SA6组肺W/D明显高于SB6组(P0.05)

结论：①NE在重度脑损伤合并胃液误吸致急性肺损伤的过程中发挥重要作用。②重度脑损伤合并胃液误吸致肺损伤较重度脑损伤无合并胃液误吸致肺损伤更严重。③重度脑损伤误吸6h内,肺组织损伤程度随时间延长呈加重趋势。④重度脑损伤合并胃液误吸早期肺内即有炎性细胞浸润,提示可尽早用药干预,以预防或减轻肺部损伤。
目的研究p38MAPK抑制剂CBS3830在糖尿病大鼠自体移植静脉中抗内膜增生的作用,从而探讨p38MAPK信号通路在静脉桥狭窄中的作用,为糖尿病患者桥血管再狭窄的预防及治疗提供新的途径。 方法将30只SPF级SD雄性大鼠(6～8周龄,体重200～250g,),随机分为假手术组(sham group, S)、对照组(control group,C )、药物组(drug group,D),每组10只。假手术组仅模拟手术过程,不进行血管移植和药物干预;另外两组首先采用腹腔注射链脲佐菌素法建立糖尿病动物模型,然后再采用改良cuff法建立自体静脉移植模型,造模前1 h药物组经胃管灌入0.

Result It was observed that MEK 5 specific inhibitor BIX02188 inhibited the formation of neurospheres

and specifically blocked ERK 5 phosphorylation 时间 but not ERK 1/2 phosphorylation. Nerve growth factor (NGF) significantly increased the phosphorylation of ERK 5 and acted as activator following inhibition by BIX02188. NGF activated phosphorylation of both ERK 1/2 and ERK. After be treated with 20μM PD98059 and 15μM BIX20188, and then activated by fluoxetine, there was significance increase phosphorylation of both ERK 1/2 and ERK 5. Conclusion Fluoxetine activates ERK 5 is essential for the proliferation of NSCs derived from mouse embryonic hippocampus. Taking these results together, fluoxetine not only played important role along MEK/ERK 确认细节 1/2 but also MEK/ERK 5 pathway aside from MEK/ERK 1/2 interference.
背景与目的： 神经病理性疼痛由于涉及到复杂的调控机理至今没有行之有效的治疗方法。传统的研究认为痛觉的传导仅限于神经元之间信号传递,而胶质细胞被认为不参与痛觉的信号传导,仅对神经元保护、支持、修复。然而近年来胶质细胞特别是星形胶质细胞在神经病理性疼痛中的作用逐步受到学者们的重视。

本实验通过观察大鼠坐骨神经慢性结扎模型的脊髓中星形胶质细胞的激活情况及其与痛觉增强之间的关系,为星形胶质细胞在神经病理性疼痛中的作用提供基础研究资料。 波形蛋白(Vimentin)主要表达于增殖期的星形胶质细胞。研究表明Vimentin在脊髓横断条件下,可在成年大鼠脊髓的星形胶质细胞中表达,在神经性病理性疼痛的大鼠模型中其表达如何?本实验通过观察大鼠CCI模型中脊髓第4-5腰椎段胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Vimentin的表达分析其与神经病理性疼痛的关系。 文献报道在神经病理性疼痛中,脊髓p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)传导通路均被激活。星形胶质细胞的激活与哪种细信号传导通路有关?本实验通过观察CCI模型中脊髓第4-5腰椎段磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达与神经系统的神经元、小胶质细胞、星形胶质细胞之间的关系,探索神经病理性疼痛中星形胶质细胞被激活后的相关信号传导通路。 方法： 1.建立坐骨神经慢性压迫模型并观察其热痛阈和机械痛阈的变化 120只SD雄性成年大鼠被随机分为2组：CCI模型组、假手术组(Sham组)。CCI模型组进行右侧坐骨神经结扎术；假手术组仅暴露右侧坐骨神经不予结扎。两组大鼠于术前1d和术后1、3、7、14、28d分别测量(每个时间点每组10只)后爪左右肢的热痛阈(PWTL)和机械痛阈(MWT),并进行自身对照和组间对照。 2. RT-PCR检测GFAP和Vimentin mRNA在大鼠CCI模型中的相对表达量 两组大鼠于每个时间点每组取5只大鼠的脊髓第4-5腰椎段,RT-PCR检测GFAP和Vimentin mRNA的相对表达量。 3.荧光免疫组化检测GFAP和Vimentin在大鼠CCI模型中的表达

两组大鼠于每个时间点每组取5只大鼠的脊髓第4-5腰椎段做石蜡切片,荧光免疫组化标记GFAP和Vimentin的表达,后选择CCI组免疫荧光强度表达最强的时间点(术后7d)的脊髓切片进行GFAP和Vimentin免疫荧光双标。并对CCI组术侧PWTL值、MWT值与GFAP、Vimentin的平均荧光强度进行关联性分析。 4.荧光免疫组化检测p-P38MAPK、p-JNK在在大鼠CCI模型中的表达 20只SD雄性成年大鼠被随机分为2组：CCI模型组、假手术组。并与术前1d和术后7d取脊髓第4-5腰椎段做石蜡切片,荧光免疫组化标记p-p38 Selleckchem E7080 MAPK和p-JNK的表达,并分别与NeuN、GFAP、OX-42进行免疫荧光双标。 结果： 1.CCI模型热痛阈和机械痛阈的变化 CCI组术后出现结扎侧脚趾并拢、屈曲、外翻等行为学变化。术后3-14d CCI组大鼠术侧足MWT值、PWTL值明显降低,与自身对照侧及Sham组相比差异有统计学意义(P<0.5)；术后7d的免疫荧光双标显示两者存在较好的分布一致区。关联性分析显示MWT、PWTL值与GFAP、Vimentin的平均荧光强度呈负相关(P
研究背景： 妊娠期高血压疾病(hypertensive disorder complicating pregnancy, HDC P)是妊娠期间常见而又特有的疾病,是引起孕产妇及新生儿死亡最常见的原因之一。本病常发生于妊娠的20周左右,患者常以无明显诱因出现头痛、眼花、下肢水肿等不适而就诊,测血压高于140/90mmHg,蛋白尿阳性等,危重者可出现全身重要脏器的损害而危及生命。根据本病的严重程度可分为妊娠期高血压、轻度或重度子痫前期、子痫、慢性高血压合并子痫及妊娠合并慢性高血压五大类。1991年在我国妊娠期高血压疾病流行病学调查研究中发现,妊娠期高血压疾病的发病率为9.4%,其中轻度子痫前期为77.7%,重度子痫前期为22.3%。孕产妇死亡率在城市为18.

Overexpression of epithelial growth factor receptor was found in squamous cell carcinomas. Vismodegib targets the mutation in the hedgehog pathway identified in basal cell carcinoma and basal cell nevus syndrome. Targeted therapies provide a novel

and potentially effective treatment alternative for patients with eyelid carcinoma not amendable for surgery, including those with metastatic, locally advanced disease, advanced age, and significant comorbidities. High selleckchem cost, need for long-term treatment, and toxicity are relative limitations.
近年来,在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)靶向治疗中,尤其是伴有表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变的患者,EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine

kinase inhibitor,TKI)越来越多地进入到临床治疗,但EGFR-TKI耐药的产生不仅影响药物敏感性,甚至出现疾病进展,成为制约其疗效的主要瓶颈。微小RNA(microRNAs,mi RNAs)是一种非编码蛋白的RNA,参与转录后水平基因的表达调控,最近研究发现,miRNAs参与了EGFR-TKIs耐药,影响肿瘤细胞对吉非替尼的敏感性。本文就NSCLC中mi 有 RNAs与EGFR-TKIs继发性耐药之间的相关性研究进展做简要的综述。
成熟干细胞在正常组织中的存在现已得到广泛证实〔1〕。造血干细胞的开创性成果引导了利用干细胞标记物发现和揭示肿瘤机制的研究。干细胞代表了整个细胞系的一部分,具有独特的功能特征,能够自我更新并能在组织中分化成不同的细胞,可以根据其细胞表面标记物来鉴别分化层次。近年来有研究表明,有少量肿瘤细胞具备自我更新与分化成不同细胞表型的能力,这些细胞对传统治疗具有抵抗能力,它们在肿瘤的发生、发展、复发、转移方面起着重要作用。
Hedgehog(Hh)信号通路在胚胎组织的分化过程中发挥着重要作用,最近研究认为该信号通路的持续异常激活与肿瘤的发生发展有着密切的关系。已有研究报道胃癌中也存在Hh信号通路的异常活化,并与胃癌的发生、增殖和侵袭转移等过程密切相关。本文就Hh信号通路在胃癌中的研究进展作一系统综述,为完善胃癌的发病机制、诊断及治疗提供新的思路。
目的观察音猬因子(Shh)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法收集2008年1月至2012年12月在武汉市第五医院手术治疗的乳腺癌患者的乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织各46例。采用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学染色检测乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中Shh

mRNA和Shh蛋白的表达,并探讨Shh蛋白与乳腺癌临床病理特征的关系。计数资料比较采用χ2检验,计量资料比较采用独立样本t检验或单因素方差分析。结果乳腺癌组织中Shh 一般 mRNA表达水平明显高于癌旁正常乳腺组织(1.54±0.47比0.60±0.38,t=-12.02,P=0.000),Shh蛋白阳性表达率也明显高于癌旁正常乳腺组织[69.6%(32/46)比17.4%(8/46),χ2=25.48,P=0.000],并且其表达水平与乳腺癌的临床分期密切相关,患者临床分期越晚,Shh蛋白表达水平越高[Ⅲ期+Ⅳ期∶Ⅰ期+Ⅱ期:77.8%(28/36)比4/10,χ2=5.28,P=0.022]。结论 Shh信号在乳腺癌组织中被激活。Shh异常表达可能与乳腺癌的发生、发展相关,其可以作为一个潜在的肿瘤标志物应用于临床。
The estrogen receptor(ER) pathway plays a critical role in breast cancer development and progression. Endocrine therapy targeting estrogen action is the most important systemic therapy for ER positive breast cancer. However its efficacy is limited by intrinsic and acquired resistance.

05)。PTZ+SB216763干预组与PTZ+DMSO实验组大鼠相比,其表达变化趋势一致,除4周组表达有所下调外(P0.05)。 2.与DMSO+SB216763对照组相比,GSK-3β的上游负调控因子AKT1在PTZ+DMSO实验组大鼠3天,1周,6周时表达上调(P0.05)。PTZ+SB216763干预组与PTZ+DMSO实验组大鼠表达趋势基本一致,除6周的表达明显下降(P0.05)。 3.PTEN为GSK-3β上游正调控因子,PTZ+DMSO实验组大鼠与DMSO+SB216763对照组大鼠相比,第3天即出现显著升高趋势,1周时上升达高峰,2周时表达下降,6周时表达低于对照组,除4周组外(P>0.05),其余各时间点均存在统计学差异(P0.05)。

4.GSK-3β的下游磷酸化底物总tau蛋白MAPT在PTZ+DMSO实验组大鼠的表达与DMSO+SB216763对照组大鼠相比,第3天即出现表达上调,并进行性上升,第4周时达高峰,第6周时下降至对照组水平。除6周组外(P>0.05),其余各时间点均存在统计学差异(P<0.05)。PTZ+SB216763干预组与PTZ+DMSO实验组大鼠相比,虽仍从第3天开始呈表达上升趋势,但上升幅度明显降低,除6周组外,其余各时间点均存在统计学差异(P
胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES细胞）是从早期囊胚内细胞团分离而出的多能性细胞。这些细胞能够体外培养无限增殖，维持自我更新，并且在特定条件下可以分化成为机体几乎所有类型的细胞。因此，ES细胞被认为是研究早期胚胎发育最重要的模型。对ES细胞的多能性维持和定向分化的研究能够为胚胎发育，再生医学和器官移植等临床医学研究提供重要的理论指导。 许多 在ES细胞中，多能性和定向分化的平衡被严格调控并处于一个相对稳定的状态。而这种平衡的维持，既需要转录因子及其构成的信号调控网络的调控，也有着来自表观遗传方面的调节，而microRNA（miRNA）作为一种重要的表观调控机制在ES细胞的多能性维持和分化调节中发挥着重要的作用。 研究发现，强烈的外部刺激，例如瞬间的低pH值胁迫，低氧胁迫等，均有利于诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPS细胞）的形成。5-氨基咪唑-4-甲酰胺-呋喃核糖苷（5-Aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleotide，AICAR）是一种膜通透性的AMP-激活的蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）的激活剂。它可以作为AMP的类似物，在不影响ATP，ADP和AMP水平的条件下激活能量代谢调控的关键蛋白激酶AMPK，从而抑制合成代谢，使细胞处于能量胁迫状态，影响ES细胞的多能性维持，但是其在ES细胞干性维持中的作用尚不清楚。本研究对AICAR处理及未处理的J1小鼠ES细胞进行研究，旨在揭示AICAR在ES细胞干性维持中的作用。主要的研究内容及结果如下：

1. AICAR与白血病抑制因子（leukaemia inhibitory factor，LIF）共同作用可维持J1小鼠ES细胞的形态，同时能够上调ES细胞标志基因的表达。在J1细胞的细胞培养液中加入终浓度为1mM的AICAR，并以培养液中加入相同体积DMSO的ES细胞作对照。碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AP）染色结果表明AICAR处理的ES细胞表现出更高的AP活性。免疫荧光染色和实时定量PCR（quantitative 点击此处 real-time polymerase chainreaction，real-time PCR）结果显示AICAR能够上调Nanog，Oct4，Sox2和Klf4这些干性标志基因的表达。此外，尽管AICAR不能在缺少LIF的情况下单独维持J1细胞的干性，但是它能够拮抗维甲酸（retinoic acid，RA）诱导的ES细胞的分化。 selleck怎么样

selleck怎么样

selleck 2.全基因组基因表达谱分析表明AICAR有利于J1小鼠ES细胞的多能性维持。对AICAR处理后的J1小鼠ES细胞提取RNA进行表达谱芯片分析，以寻找AICAR的下游调控基因，并进一步揭示AICAR在ES细胞干性维持中的作用。芯片数据证明，AICAR能够显著上调干性相关基因的表达，同时也能下调分化相关转录因子的表达。利用筛选得到的基因，在DAVID（Database for Annotation，Visualization and Integrated Discovery）在线软件上面进行GO（Gene Ontology）和KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes andGenomes）分析，发现AICAR不仅能够影响AMPK通路，同时也能影响其它与J1小鼠ES细胞的干性维持相关的通路，如BMP，MAPK和TGF-β通路等。 3. AICAR可通过促进BMP通路从而拮抗RA诱导的ES细胞分化，利于其多能性维持。利用Real-time PCR对AICAR处理及未处理的细胞中Bmp2，Bmp4及其下游调控基因Ids，Coch，Dusp9进行检测，发现这些BMP通路相关基因的表达均上调。同时，AICAR还能够抑制RA诱导的上述基因表达的下调。Dorsomorphin（Dorso）是BMP通路的抑制剂，而其对AICAR作用的抑制进一步表明AICAR能够通过激活BMP通路来维持ES细胞的多能性。

4. AICAR影响J1小鼠ES细胞的表观遗传修饰。AICAR能够通过调控表观遗传相关基因，如Dnmt3a，Dnmt3b，Smarca2，Mbd3，Arid1a的表达，从而影响ES细胞的表观修饰状态。实验结果表明，AICAR处理后全基因组DNA甲基化（5-methylcytosine，5mC）水平下调，而DNA羟甲基化（5-hydroxymethyl cytosine，5hmC）水平保持不变。对于组蛋白修饰而言，AICAR处理导致组蛋白3第9位赖氨酸乙酰化（histone H3lysine9acetylation，H3K9Ac）水平的下调和组蛋白3第27位赖氨酸三甲基化（histone H3lysine27tri-methylation，H3K27me3）水平的上调。此外，AICAR通过调控长的居间非编码RNA（long intervening non-coding RNA，lincRNA）的转录，从而影响ES细胞的表观遗传修饰状态。 5.小RNA（small RNA，sRNA）高通量测序结果表明AICAR能够显著影响对ES细胞发育具有重要作用的miRNAs的表达。我们对比了经AICAR处理的J1小鼠ES细胞和未经处理的J1细胞中miRNAs的表达模式，并利用Real-time PCR验证了这些差异表达的miRNAs，同时对多能性和分化相关的miRNAs和它们的靶标做了相互验证。结果表明大量多能性维持相关的miRNAs表达上调，而分化相关的miRNAs表达下调。 6.

5-14.5d胎龄的小鼠胎儿分禺MEFs,传代培养后选取第3代MEFs制备饲养层,采集4d的小鼠囊胚置于其MEFs饲养层的共培养体系中,经体外培养3-4d,可以获取优质的ICM,这为体内受精囊胚来源ESCs的分离培养奠定了基础。 1.2小鼠杂合二倍体孤雌囊胚生成途径的优化 本研究采用5种化学激活方法即乙醇、乙醇+6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)、乙醇+6-DMAP+细胞松弛素B (CB)、SrCl2、SrCl2+CB处理小鼠成熟卵母细胞,通过观察激活卵母细胞第二极体排出情况和核型分析,探讨不同激活方法所得激活卵母细胞染色体倍性的倾向类型,比较不同染色体倍性激活卵母细胞的体外发育能力,筛选有利于形成杂合二倍体孤雌囊胚的激活方法。结果表明：在含有10%乙醇培养液中激活卵母细胞5min的基础上,添加6-DMAP有利于抑制第二极体的排出,促进双原核(2PN)杂合二倍体孤雌胚胎的形成,获取更高的过二细胞阻滞率和桑葚胚/囊胚发育率；采用含有10mM

SrCl2和CB处理卵母细胞4h,也能够获取较多的双原核(2PN)杂合二倍体和较高的桑葚胚/囊胚发育率,因此,以上两种孤雌激活方法适宜用于获取小鼠杂合二倍体孤雌囊胚。 1.3人工重组异期卵母细胞核二倍体孤雌囊胚(含有速激核成熟新生小鼠生长初期卵母细胞和M Ⅱ期卵母细胞基因组的二倍体孤雌胚胎)的构建 本研究分别研究了CB对生发泡(GV)期卵母细胞去核效果的影响、去除成年小鼠MⅠ期卵母细胞GV的方法选择、新生小鼠生长初期卵母细胞与去核GV期卵母细胞黏合体系的筛选、电融合条件选择以及重构胚化学激活方法的筛选等,旨在构建含有速激核成熟新生小鼠生长初期卵母细胞和MⅡ期卵母细胞基因组的二倍体孤雌胚胎,用于ESCs的分离。结果表明：预先采用10μg/mL CB溶液处理GV期卵母细胞,0.5%链霉蛋白酶去除GV期卵母细胞的透明带,显微操作仪上去除生发泡,将去除生发泡的GV期卵母细胞与新生小鼠生长初期卵母细胞移入自制凹窝内进行黏合,选择1.5KV/cm-2.0KV/cm的电场强度、40μS的脉冲宽度对黏合细胞进行电击,发生电融合和电激活,获得排出了第一极体的速激核成熟重构卵母细胞。利用显微操作仪将重构卵母细胞的核区移植到去除第一极体的MⅡ期成熟卵母细胞的透明带下,通过电融合使两者发生融合,形成含有两个MⅡ期卵母细胞核的重构卵细胞,再经过对其进行7%乙醇(5min)联合2.5mmol/L6-DMAP http://www.selleck.cn/autophagy.html (4h)(?)勺激活后用于体外培养,可以构建出含有速激核成熟新生小鼠生长初期卵母细胞和MⅡ期卵母细胞基因组的二倍体孤雌胚胎。 2.小鼠ESCs、pESCs和重构pESCs(?)勺分离、培养与鉴定 2.1小鼠体内受精囊胚ESCs的分离、培养与鉴定 本研究采集13.5d胎龄的胎儿分离MEFs,选取第3代MEFs制备饲养层；分别采用全胚法和免疫外科法从4d胚龄的囊胚中获取ICM,将ICM小团块移到饲养层上进行增殖培养,观察集落形态,并对细胞集落进行多能性鉴定。结果表明：采用全胚法和免疫外科法均能分离得到小鼠ESCs集落,其集落形成率差异不显著(30.26±2.77%vs32.92±4.37%,P>0.05)。两种方法所得ESCs集落具有典型的ESCs形态特征,AKP染色阳性,ESCs的染色体为二倍体,具有正常核型,Oct-4和SSEA-1免疫细胞化学检测为阳性,RT-PCR检测表明ESCs表达多能性基因：Oct-4和Sox-2,

那个 RT-PCR检测显示EB中三个胚层的标记基因(Fgf-5、Bra

T和Afp)均为阳性。 2.2昆明小鼠孤雌囊胚来源pESCs的分离、培养与鉴定 鉴于孤雌囊胚于体外培养时间过长,胚胎难以突破透明带引起囊胚孵化率和贴壁率降低的情况,本研究选用免疫外科法分离单倍体pESCs(源自SrCl2激活卵母细胞4h所得囊胚)和二倍体pESCs(源自10mM Angiogenesis抑制剂 SrCl2+5μg/mL CB激活卵母细胞4h所得囊胚),并对所得细胞进行多能性鉴定,旨在探讨孤雌囊胚染色体倍性对pESCs分离和培养效率的影响,筛选适宜倍性的孤雌囊胚获取pESCs。(?)吉果表明：本研究所得到的pESCs集落具有与体内受精囊胚来源ESCs类似的多能性鉴定效果。从二倍体孤雌囊胚分离所得pESCs的集落形成率显著高于单倍体孤雌囊胚处理组(13.54±4.43%vs7.17±4.45%,P0.05),分别极显著地高于50U和100U SLO处理组(p重构囊胚来源ESCs裂解液处理组(45.00±4.36个、53.67±3.06个)>孤雌囊胚处理组(35.67±2.52个47.67±4.16个)；TSA和5-Aza-dC的预处理有助于促进雄性MEFs的重编程,但是,在没有ESCs裂解液的诱导作用下,仅采用TSA和5-Aza-dC预处理雄性MEFs并不能获得多能干细胞集落；无ESCs裂解液参与的单纯重编程操作过程和雄性的MEFs裂解液并不能使雄性MEFs发生重编程,因此,促使雄性MEFs发生重编程的物质来源于ESCs的裂解液。 4. ESCs裂解液诱导MEFs重编程所得多能干细胞集落的来源鉴定 采用双重PCR性别鉴定方法对体内受精囊胚来源经性别鉴定为雌性ESCs裂解液、孤雌囊胚来源pESCs裂解液和重构孤雌囊胚来源ESCs裂解液诱导雄性MEFs重编程所得到的多能干细胞进行性别鉴定,鉴定所得多能干细胞的来源,判定细胞提取物诱导的重编程体系的可靠性。结果表明：体内受精囊胚来源经性别鉴定为雌性ESCs的裂解液、孤雌囊胚来源pESCs裂解液和重构孤雌囊胚来源的ESCs裂解液均能够诱导雄性MEFs重编程为多能干细胞,所得多能干细胞的基因组DNA中具有250bp的Sry基因序列片段和339bp的ZFX基因序列片段,为雄性细胞。因此,pESCs裂解液重编程所得具有多能性特征的细胞是源自于雄性MEFs,它们所表现出的多能性检测指标的阳性反应并不是由于裂解液制备过程中的ESCs污染所致。 5. ESCs裂解液诱导种间体细胞重编程的可行性研究 本研究以鸡胚成纤维细胞作为重编程的受体细胞,采用小鼠体内受精囊胚来源ESCs裂解液与其进行共孵育,通过形态学观察,研究其对鸡胚成纤维细胞的逆转化效果,对所获得干细胞集落进行多能性检测,旨在探讨小鼠ESCs裂解液作用于异种体细胞后,使其重编程逆转化为多潜能干细胞的可行性。结果表明：与小鼠ESCs裂解液共孵育的鸡胚成纤维细胞均变为圆形细胞,未见梭形的贴壁细胞,形成了42.33±4.

638%和77.756%(P<0.001)；K562-MKK3(Ala)细胞Gγ-mRNA水平下降,为K562-pcDNA3.1细胞的37.996%(P<0.001)；SB预处理之后,K562-MKK3(Glu)+SB细胞和K562(NaB)+SB细胞HbF表达下降,分别为K562-MKK3(Glu)细胞和K562(NaB)细胞的51.515%和35.142%(P<0.001)；K562-MKK3(Ala)细胞HbF表达下降,为K562-pcDNA3.1细胞的45.144%(P
研究背景

此网站 角膜具有透明、无血管、有弹性的特点和较强的屈光能力。正常角膜组织分为上皮层、前弹力层、基质层、后弹力层和内皮层；其中上皮层由多层上皮细胞组成,基质层含有角膜细胞,内皮层由单层排列内皮细胞构成。角膜缘含有丰富的血管网,主要供给角膜周边部的养分；房水、泪液等也是养分的重要来源。 在炎症、外伤、免疫损害、微生物感染等病理因素作用下,角膜缘周边血管网逐渐长入透明角膜内,形成角膜新生血管。角膜新生血管在抵御病理损害中具有重要作用,可以促进炎症吸收、角膜修复并改善角膜血供；同时由于大量的免疫效应细胞聚集在角膜,改变了角膜固有的免疫学特征,导致角膜相对免疫赦免机制的消除；降低角膜的透明性,严重影响视力；为角膜疾病的后续治疗带来重大挑战。 深入研究角膜新生血管生长和调控的机制具有重要的意义。研究发现角膜新生血管的影响因素有很多,炎症反应是角膜新生血管的重要影响因素之一。角膜新生血管与炎症反应相互作用、相互依赖、相互协同。角膜炎性细胞浸润通常出现在新生血管之前,角膜炎性浸润部位与新生血管部位一致。炎症反应引起多种炎性介质、细胞因子释放,从而打破促血管生长因子和抑制血管生长因子之间的平衡,最终导致角膜新生血管。 信号转导研究是生命科学的热点和前沿,其基本研究思路已浸染生命科学的各领域。信号转导将为解释生命基本现象、细胞代谢、肿瘤分子机制、病理反应过程以及开发新型药物提供新的思路。丝裂原活化蛋白激酶是一组能被不同细胞外刺激激活的一系列丝氨酸-苏氨酸激酶,可磷酸化其它细胞质蛋白,并从细胞浆移位至细胞核,作用于多种转录因子,从而激活不同基因表达,产生复杂的生物学功能。在哺乳动物,高度保守的丝裂原活化蛋白激酶是信号从细胞外到细胞核传递的重要信使,参与了胚胎发育、细胞分化、细胞增殖、细胞死亡、对环境的应激适应、炎症反应等多种细胞生理及病理反应。

目前共发现了四种丝裂原活化蛋白激酶亚族,分别是细胞外信号调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶、p38和ERK5。细胞外信号调节蛋白激酶主要作用于细胞分化、转化和增殖；c-Jun氨基末端激酶参与胚胎发育、细胞分化,并且与肿瘤的发生密切相关：ERK5信号通路参与细胞周期、细胞增殖和早期基因表达的调控；而p38信号通路则在炎症反应中具有重要作用。 p38信号通路的激活是细胞内磷酸化级联反应的最后步骤,磷酸化p38是p38的活化形式。p38激活后立即进入细胞核,激活多种蛋白激酶和转录因子,产生复杂的生物学效应。p38在炎症反应过程中的多效性、高效性,使得p38信号转导通路成为炎症相关疾病研究的新的作用靶点而备受关注。p38成为丝裂原活化蛋白激酶家族中调控炎症反应的最重要成员。 炎症反应与角膜新生血管密切相关,而p38信号转导通路在调控炎症反应中具有重要作用,因此p38信号转导通路可能在角膜新生血管调控中具有重要作用。研究也发现p38抑制剂在炎症相关疾病动物模型中表现出较好的抗炎作用,p38信号转导通路抑制剂SB220025能显著降低肉芽肿组织内血管密度。角膜新生血管研究一直是眼科研究的热点和难点。p38信号通路具有复杂的生物学效应,参与炎症反应过程,调控多种细胞因子的表达,从该通路研究角膜新生血管的机制,必将成为研究的新方向和新靶点。 Dabrafenib订单 实验中,我们通过检测血管化进程中大鼠角膜磷酸化p38表达,来探讨p38信号转导通路和角膜新生血管的相关性；通过研究p38信号转导通路特异性拮抗剂SB203580对大鼠角膜的毒性作用,来研究其用于阻断信号转导通路的可能性；进一步研究SB203580对大鼠角膜新生血管的抑制作用,探讨p38信号转导通路参与调控角膜新生血管的可能机制；最后通过可溶性血管内皮生长因子受体2试图阻断血管内皮生长因子的作用,进一步检测磷酸化p38的表达,并分析p38信号转导通路和血管内皮生长因子的关系。 第一部分磷酸化p38在大鼠角膜血管化进程中的表达 目的 检测p38和磷酸化p38在大鼠角膜血管化进程中的表达,探讨大鼠角膜新生血管生长是否和p38信号转导通路的激活相关,并进一步分析p38和磷酸化p38在大鼠角膜血管化进程中时间和空间分布特征,拟最终证实p38信号转导通路激活可能与大鼠角膜新生血管相关,p38信号转导通路的早期激活可能是大鼠角膜新生血管的始动因素之一,为进一步研究奠定基础。

方法 1.角膜缝线法建立SD大鼠角膜新生血管模型建立大鼠右眼新生血管模型,在大鼠角膜缘内1mm等间距缝合3针,深及基质层。选取未缝线的正常角膜作为阴性对照组,并将缝线后大鼠随机分为缝线后第1日组,第3日组以及第7日组,每组8只。 2.显微镜下观察角膜缝线后每日在手术显微镜下观察,均放大16倍,注意角膜透明度、上皮完整性、缝线数量以及是否存在角膜感染。 3.计算角膜新生血管面积计算角膜缝线后第1日、第3日以及第7日,分别在显微镜下测量角膜新生血管长度,并依据Robert公式计算角膜新生血管面积。 4. Western Blot检测缝线后角膜血管化进程中p38和磷酸化p38的表达缝线当日以及缝线后第1、3、7日,分别从各组随机选取5只大鼠,摘取角膜,收集角膜蛋白,采用Western BGB324 Blot方法检测各组角膜p38以及磷酸化p38的表达,并检测目的蛋白IOD与内参GAPDH的IOD,二者比值作为目的蛋白的相对表达量。 5.免疫荧光检测p38和磷酸化p38在角膜上的表达按照分组分别在特定时间摘取角膜,采用免疫荧光的方法检测p38和磷酸化p38在角膜的表达以及定位。 6.统计学分析采用SPSS13.0软件分析,计量资料以均数±标准差表示。当方差齐性时,采用one-way ANOVA分析；方差不齐时采用Welch法校正。组间比较,当方差齐性时,采用LSD分析；当方差不齐性时,采用Dunnett T3进行分析。所有统计推断均采用双侧检验,检验水准α=0.05。 结果 1.显微镜下观察缝线后7d,角膜缘血管网充血,缝线处角膜水肿增厚,并随时间延长逐渐加重,缝线后3d,睫状充血明显,角膜缝线处角膜缘明显局限性充血,可见新生血管缓慢长入,每处约2-5支,缝线处角膜未见明显混浊,全角膜透明；缝线后7d,见大量新生血管长入透明角膜,新生血管呈密集网状,无法计数,部分新生血管长到缝线处,缝线处角膜轻度混浊并增厚。 2.角膜新生血管面积缝线后第1日,未发现新生血管；缝线后3、7d,角膜新生血管面积分别为4.1-1.22、7.26±0.72mm2；而正常角膜无新生血管。 3.Western Blot结果 各组角膜p38的相对表达量为：正常角膜组0.5681±0.1074,缝线后第1日组为0.