19±8.61)% vs (47.17±10.28)%,P<0.01);与miRNA-155模拟体组比较,阻遏物组IFN-γRα蛋白表达增加,T-bet蛋白表达减少(均P<0.01),阻遏物较miRNA-155模拟体组降低(P<0.01),IFN-γRα蛋白表达低于对照组(均P0.05)。术前肌钙蛋白阳性组miRNA-155、IFN-γRα蛋白和IFN-γ表达水平与肌钙蛋白阴性组无明显差异(均P>0.05);术后12小时,肌钙蛋白阳性组与肌钙蛋白阴性组的miRNA-155、hsCRP、IFN-γ表达均显著增高(均P<0.05),且肌钙蛋白阳性组较肌钙蛋白阴性组增高更为明显(P<0.05);IFN-γRα蛋白表达显著低于(均P<0.01),肌钙蛋白阳性组较肌钙蛋白阴性组降低更为明显(P
目的:

探讨骨形态形成蛋白4(BMP4)对大鼠远端肺动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的影响及其机制,为进一步探究其在低氧性肺动脉高压(HPH)发病过程的可能作用与机制打下基础。 研究内容和方法: 一、BMP4对大鼠远端肺动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的影响 将200-300g雄性Wistar大鼠麻醉后,取出心肺组织,置于显微镜下,用显微镊和显微剪刀于显微镜下小心分离出远端(4-5级)肺动脉,剥离内外膜后,采用胶原酶消化法获得远端肺动脉平滑肌细胞,将细胞种于放置在35mm培养皿内的圆形载玻片上,培养至第三天细胞密度达到50%,将细胞随机分为三个组:(1)未处理组,未给予刺激物; MLN2238核磁共振 (2)对照组,用等量的BMP4溶解缓冲液处理PASMCs 60h; (3)BMP4组,用BMP4(50ng/ml)处理PASMCs60h。细胞用Fura-2在细胞培养箱内孵育1h,使Fura-2进入细胞内,用荧光显微镜检测,根据标准曲线,推算细胞内Ca~(2+)浓度。 二、BMP4影响大鼠远端肺动脉平滑肌细胞TRPC1,6 mRNA和蛋白质表达及其机理研究 1、BMP4对PSMC表达TRPC1、6 mRNA和蛋白质的影响:实验采用原代培养大鼠远端肺动脉平滑肌细胞,培养至第五天细胞密度达到80-90%,将细胞随机分为三个组:(1)未处理组,未给予刺激物;(2)对照组,用等量的BMP4溶解缓冲液处理PASMCs 60h;(3)BMP4组,用BMP4(50ng/ml)处理PASMCs60h。收集细胞,用iQ SYBR Green supermix试剂实时定量细胞中的TRPC1,6 mRNA的表达;用Western Blotting检测TRPC1,6蛋白质的表达。 2、BMP4对Smad1/5/8 ,ERK1/2, p38MAPK信号通路的影响:原代培养大鼠远端肺动脉平滑肌细胞,培养至第五天细胞密度达到80-90%,将细胞随机分为七个组:(1)对照组,用等量的BMP4溶解缓冲液处理PASMCs15min;(2)BMP4(50ng/ml)处理组:分别用BMP4(50ng/ml)处理PASMCs15min、30min、1h、4h、8h、60h。收集细胞,用Western

Blotting检测BMP4对Smad1/5/8 ,ERK1/2, p38MAPK信号通路的影响。 3、BMPRⅡSiRNA、SB及PD对BMP4/Smad1/5/8 ,ERK1/2, p38MAPK信号通路的影响:用Western Blotting检测BMPRⅡ-SiRNA、PD和SB对BMP4刺激Smad1/5/8、ERK1/2和p38MAPK信号通路的影响。 PD98059 4、SB及PD对BMP4促进大鼠远端PSMCs表达TPRC1,6mRNA和蛋白质的干预作用:原代培养大鼠远端肺动脉平滑肌细胞,培养至第五天细胞密度达到80-90%,将细胞随机分为四个组:(1)空白对照组,细胞未给予任何刺激物;(2) DMS0对照组, DMSO预处理细胞30min, BMP4(50ng/ml)处理PASMCs60h; (3)SB组,SB(5μM)预处理细胞30min,

BMP4(50ng/ml)处理PASMCs60h;(4)PD组,PD(10μM)预处理细胞30min, BMP4(50ng/ml)处理PASMCs60h;收集细胞,用iQ SYBR Green supermix试剂实时定量细胞中的TRPC1,6 mRNA的表达,用Western Blotting检测TRPC1,6蛋白质的表达。 5、SB或PD对BMP4增加PSMCs内钙离子浓度的影响的研究:原代培养大鼠远端肺动脉平滑肌细胞,培养至第三天细胞密度达到50%,将细胞随机分为四个组:1)空白对照组,细胞未给予任何刺激物;(2) AG-014699分子量 DMS0对照组, DMSO预处理细胞30min, BMP4(50ng/ml)处理PASMCs60h;(3)SB组,SB(5μM)预处理细胞30min, BMP4(50ng/ml)处理PASMCs60h (4)PD组,PD(10μM)预处理细胞30min, BMP4(50ng/ml)处理PASMCs60h。细胞用Fura-2孵育,使Fura-2进入细胞内,用荧光显微镜检测,根据标准曲线,推算细胞内Ca~(2+)浓度。三、慢性低氧对小鼠肺组织内BMP内源性拮抗蛋白表达的影响 实验选用雄性的BMP4基因敲除的同种系BMP4+/+ C57BL/6J纯合子小鼠和BMP4+/- C57BL/6J杂合子小鼠,将BMP4+/+ C57BL/6J小鼠随机分为5组(n=3或4):即正常对照组、低氧1天组、低氧3天组、低氧7天组和低氧21天组。6只BMP4+/- C57BL/6J小鼠随机分成低氧1天和对照2组。将低氧小鼠置于低氧装置内,调节箱内氧浓度为10%,每天24小时持续低氧。对照组小鼠除吸入空气外,其它饲养条件与实验组相同。低氧完成后,麻醉小鼠取出心肺组织,左肺储存于-80。C冰箱备用,右肺组织提取总RNA;用实时定量PCR检测BMP内源性拮抗蛋白的mRNA表达水平。 结果: 一、BMP4能够增加大鼠远端PASMCs内钙离子浓度,未处理组、仅以溶解液处理对照组和50ng/ml BMP4处理组,[Ca~(2+)]i分别为204.07±1.22nM; 170.64±0.68nM; 415.52±3.94nM,实验组PASMC内钙离子浓度明显高于对照组,P值〈0.05。 二、BMP4能够促进大鼠远端PASMCs的TRPC1、6mRNA及蛋白的表达,未处理组和对照组比较无差异表达,与对照组比较BMP4组TRPC1,TRPC6mRNA表达量明显升高,分别上升1.69倍,2.08倍(P〈0.

溃结灵含药血清对正常大鼠结肠上皮细胞增殖的影响 结肠上皮细胞在肠黏膜损伤修复中具有重要的作用,UC发病时,促进结肠上皮细胞的增殖、移行、分化,可加速受损黏膜的修复以及肠黏膜屏障功能的恢复。本实验采用溃结灵含药血清干预结肠上皮细胞,探讨溃结灵含药血清对结肠上皮细胞增殖的影响。 方法：采用血清药理学方法制备溃结灵含药血清；MTT法测定溃结灵含药血清干预大鼠结肠上皮细胞12、24、48h后细胞增殖情况。 结果：空白大鼠血清对大鼠结肠上皮细胞(CEC)生长无影响,溃结灵中剂量(5%含药血清)作用24h、48h均明显促进CEC增殖(p<0.05)；②24h时,各浓度TNF-α均明显抑制结肠上皮细胞增殖(p0.05)。 6.溃结灵含药血清对TNF-α干预下大鼠结肠上皮细胞ITF、EGFmRNA表达的影响 ITF、EGF在胃肠道上皮保护和促进黏膜愈合方面发挥着重要的作用,与UC的修复愈合关系密切。本研究观察溃结灵含药血清对TNF-α干预下结肠上皮细胞EGF及ITFmRNA表达的影响,以进一步在离体细胞水平探讨溃结灵促进肠黏膜损伤修复的作用靶标。

方法：以50ng/mlTNF-α干预结肠上皮细胞6h,造成细胞损伤模型,采用荧光定量PCR (Real-Time PCR)法检测不同浓度溃结灵含药血清对此细胞损伤模型ITF及EGFmRNA的表达的影响。 结果：①模型组EGF、ITFmRNA表达较空白对照组减低；②溃结灵各剂量组(?)GFmRNA相对表达量与模型组相比,无统计学意义(p>0.05)；③溃结灵高(10%含药血清)、中剂量组(5%含药血清)ITFmRNA表达量明显高于模型组(p<0.05,p<0.05),溃结灵含药血清高剂量组TGF-α含量显著升高(p
目的： 吸烟明显增加动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)斑块的破裂和破裂后血管内血栓形成的危险性,然而相关分子机制尚不明确。微囊泡(Micro 时间 vesciles, MVs)是细胞凋亡过程中产生的膜性囊状结构,近年研究证实动脉粥样斑块中存在大量单核巨噬细胞源性MVs,其致病力较母细胞更强、更持久,与AS斑块的进展密切相关。我们前期研究发现,TSE (Tobacco smoke extract, TSE)可增加单核细胞源性MVs的产生,该MVs携带组织因子,体外具有强大的促凝活性,解释了吸烟患者血液的高凝状态和斑块破裂后血栓形成的机制,但尚不能够解释吸烟患者AS斑块破裂的机制。因此,本研究旨在探讨TSE诱导巨噬细胞源性MVs是否具有蛋白水解酶活性,并探讨TSE诱导的蛋白水解酶活性MVs的分子性质和产生的分子信号通路机制。 所以 方法： 1.PMA诱导人THP-1单核细胞建立巨噬细胞模型和贴壁筛选法分离诱导外周血单核巨噬细胞； 2.酶谱法和荧光底物分解法测量TSE诱导MVs水解酶活性；

3.在37℃应用Pro-MMP2与分离MVs体外共孵育1h,然后用酶谱法检测TSE诱导MVs激活Pro-MMP2的活性； 4.免疫荧双染色共聚焦显微镜观察TSE诱导巨噬细胞膜性基质金属蛋白酶1(membrane type1metalloproteinase, MT1-MMP)又称MMP14和细胞凋亡早期标志物磷脂酰丝氨酸(PS)表达及分布； 5. Western Blot检测TSE诱导巨噬细胞MMP14蛋白表达变化、MAPKs信号通路的激活和MVs携带MMP14情况； 6.应用流式细胞技术测量TSE诱导总MVs和MMP14+MVs数量； 7.应用凋亡抑制剂(caspase inhibitor, CASPi),观察TSE诱导MMP14+MVs的产生和活性； 8.应用MAPKs信号通路p38/ERK/JNK特异性抑制剂干预细胞后,观察TSE诱导MVs产生和活性。

通常 结果： 1.成功应用PMA建立THP-1巨噬细胞和贴壁筛选法分离诱导人外周血原代单核巨噬细胞； 2.TSE诱导MVs可动态水解人工合成荧光底物肽段1和降解凝胶中天然底物明胶蛋白和胶原蛋白； 3.TSE诱导MVs可激活人工重组Pro-MMP2的活性,级联放大效应发挥水解胶原蛋白的活性； 4.TSE诱导巨噬细胞呈浓度和时间依赖性增加MMP14的表达,共聚焦显微镜显示MMP14在巨噬细胞膜上呈结节性表达增加且与细胞膜的早期凋亡标志分子PS共定位,提示TSE诱导MVs携带MMP14； 5.流式分析显示TSE可诱导巨噬细胞源性总MVs和MMP14+MVs的产生； 6. CASPi可明显抑制TSE诱导巨噬细胞源性总MWs和MMP14+MVs的产生,并抑制MVs水解酶活性,不影响巨噬细胞表达MMP14； 7.TSE可激活MAPKs信号通路,使通路重要蛋白p38、ERK和JNK磷酸化,其中p38和JNK磷酸化与TSE诱导的巨噬细胞表达MMP14有关,与ERK的磷酸化无关； 8.应用p38和JNK特异性抑制剂可明显减少TSE诱导的MMP14+MVs的数量和活性。 结论： TSE干预巨噬细胞可明显增加蛋白水解酶活性MVs产生,与其携带的跨膜蛋白酶基质金属蛋白酶家族的MMP14有关,具有强大胶原和明胶蛋白酶的活性；TSE诱导的水解酶活性MVs产生与MAPKs信号通路中JNK和p38的磷酸化有关,与ERK磷酸化无关。我们的研究提示TSE诱导的蛋白水解酶活性MVs可能在AS斑块薄壁纤维帽形成中起着重要作用,是斑块破裂新的致病因子。
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种严重危害养猪业的病毒性传染病,主要表现为母猪严重的繁殖障碍及仔猪的呼吸系统疾病和生长受阻。PRRSV为单股正链RNA病毒,自20世纪80年代末爆发以来,PRRSV已经严重威胁到了全球养猪业的发展,并且造成了巨大的经济损失。自1995年我国报道发生该病以来,该病己成为困扰我国养猪生产中最重要的病毒性传染病之一。特别是2006年在我国出现的高致病性蓝耳病,导致全国各地大批生猪死亡,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV感染猪可以引起强烈的间质性肺炎,提示我们炎症反应在PRRSV感染和致病性方面扮演着十分重要的角色。然而,目前对这种毒株感染后引起宿主细胞的信号转导机制知之甚少。针对这种新的PRRSV,本文开展了对其诱导宿主细胞产生炎症反应信号转导机制的研究,为阐明PRRSV的致病机理以及其新型疫苗的研制提供理论依据。具体研究内容包括： 1.

In metastatic disease the addition of trastuzumab to chemotherapy is standard of care in Her2 positive disease. In the HER2 negative

population,the treatments remain limited.In the first line setting,the standard of care is a combination of fluoropyrimidine and platinum containing chemotherapy,with or without epirubicin or docetaxel.The results of targeted therapy trials have by and large been disappointing,but none of these trials looked at an appropriately enriched population.Finally there is a meager overall survival benefit in treating patients with metastatic disease in the second line setting,with either irinotecan,docetaxel or ramucirumab however none of these drugs 查找更多 have been compared head to head in a well-powered randomized controlled trial.
目的:建立荧光原位杂交方法(fluorescent in situ hybridization,FISH)检测ROS1基因重排,评价检测试剂在临床样本中的检测情况。方法:依据ROS1断裂重排方式,设计、制备双色荧光探针。以人外周血培养细胞为检测对象评价ROS1基因重排检测探针的灵敏度和特异性,建立阴性阈值。以NSCLC患者的肿瘤组织样本为对象进行ROS1重排检测及性能评价。结果:建立的FISH方法在人外周血培养细胞检测中特异性和灵敏度均达到100%,在对192例临床样本制备的高密度组织芯片的检测中,筛查出1例ROS1

FISH阳性样本。结论:本研究制备的双色荧光探针可用于ROS1基因重排检测。通过ROS1重排检测,将有助于临床方案制定,辅助个体化治疗。
目的探讨分子生学标记物与重组人血管内皮抑制素靶向治疗非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)疗效之间的关系。方法选择符合要求的非小细胞肺癌患者68例,随机均分为A组和B组,每组34例。A组采用多西他赛+顺铂(docetaxel NVP-BGJ398 and cisplatin,DP)及吉非替尼化疗,B组在A组化疗方案的基础上加用重组人血管内皮抑制素。采用免疫组化的方法检测表皮生长因子受体(epidermao growth factor receptor,EGFR)、KRAS基因(K-ras,p21)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、乳腺癌1号基因(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)、棘皮动物微管相关类蛋白4与间变性淋巴瘤激酶融合基因(echinoderm mierotubule-associated protein-like-4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)、核苷酸切除修复交叉互补1(excision repair cross complementing 1,ERCC1)、β-微管蛋白和分化抗原簇3(Cluster of differentiation 3,CD3)生物学标记物的表达情况。结合2组患者生物学标志物的表达情况和无进展生存期(progression free survival,PFS),统计出适合不同方案的人群类型。结果 B组的中位PFS较A组显著延长;无论VEGF和BRCA1低表达或高表达,B组的中位PFS较A组显著提高;ERCC1、KRAS、EML4-ALK和β-微管蛋白高表达,B组的中位PFS较A组有显著提高;EGFR和CD3低表达,B组的中位PFS较A组显著延长(P<0.05)。结论VEGF和BRCA1高表达或低表达,KRAS、ERCC1、EML4-ALK和β-微管蛋白高表达及EGFR和CD3低表达的非小细胞肺癌患者对DP及吉非替尼联合重组人血管内皮抑制素靶向治疗较为敏感。
肺癌脑转移是肺癌晚期严重并发症,其中大部分为非小细胞肺癌来源。目前对非小细胞肺癌脑转移若不治疗,整体生存中位时间约2~3个月。传统治疗包括:系统性化疗、全脑放疗、立体定向伽马刀放射治疗及手术切除,但患者总体生存中位时间也不超过1年。近几年,大量临床资料显示靶向治疗用于非小细胞肺癌脑转移能显著改善患者的预后及生存时间,但随着治疗时间的延长,几乎都出现耐药现象,耐药机制有待进一步研究。本文就非小细胞肺癌脑转移靶向治疗及耐药机制的研究进展进行综述。
恶性肿瘤基础与临床的相关研究成果正日新月异地推动着临床肿瘤学的发展与进步。因此,在现有基础上,有必要对高等医学院校临床医学生进行更为系统、全面、优化的《临床肿瘤学》理论与实践相关内容的教学。全文就如何构建完善的《临床肿瘤学》教学体系,包括国内外教学研究趋势、教学内容、教学方法等提出一点建议。
外周T细胞及自然杀伤细胞(T/NK)淋巴瘤是一组少见而又异质、以侵袭性强为特征的恶性肿瘤。由于对该组疾病的病理生物学、特别是遗传和分子生物学改变所知甚少,当前世界卫生组织(WHO)分类根据临床表现将其定义的诸多病种归类到白血病、皮肤肿瘤、结外病变以及淋巴结病变这几组疾病之中。近年来,有关T/NK细胞的亚群构成以及细胞分化方面的研究进展有助于我们更深入了解这些肿瘤的生物学特性。此外,一些新的遗传学改变以及信号路径调节失常也正被发现,这些分子层面的异常,不仅能用作诊断和预后标志物,还是研发治疗新措施的潜在靶点。
在晚期结直肠癌的疗效评价中,总生存期(overall

Epigenetics合成 Library cell assay survival)、无进展生存期(progression free survival)及基于实体瘤的疗效评价、生活质量及药物不良反应等疗效评价标准在临床中已得到了广泛的运用,但是在临床使用中其各自的疗效评定价值及意义却各不相同.同时,随着分子靶向药物及新的治疗方法的开展,现有疗效评价标准的缺点也不断的显露出来.因此,探索能够早期有效反映药物及治疗方法有效性的疗效评定指标成为必然.

26倍,1.99倍及1.78倍,差异有统计学意义(p<0.001),而P17检测occludin蛋白的表达,OIR组减少,仅为正常组的36.2%,差异有统计学意义(p<0.001),免疫荧光化学显示正常小鼠上RPE较强且边界清晰完整的occludin免疫荧光反应,OIR小鼠细胞问occludin免疫荧光反应不仅在强度上减弱,并且边界变得模糊且有多处缺损。腹膜下注射PD98059后,取各蛋白表达高峰时间点各蛋白的表达做统计学分析,p-ERK及VEGF表达较OIR组分别下降49.4%及35.4%(p0.05),而HIF-1α的表达为正常组的2.12倍,与OIR组问无统计学差异(p>0.05)。检测P17时该组Occludin蛋白,较OIR组有明显升高,上升幅度为35.5%,两组问差异有统计学意义(p<0.005),且免疫组织化学检测occludin免疫荧光反应强度增强,且少有缺损。利用FITC-Dextran检测OIR组及OIR+PD98059组小鼠外层血-视网膜屏障的渗漏情况,腹膜下注射PD98059的OIR小鼠,oBRB的渗漏点较OIR组明显减少,渗漏点数值为3.64±2.04vs10.06±2.91,下降了73.4%,两组问差异有统计学意义(p
目的：

寻找更多 面神经的损伤在临床上较为常见，且损伤后很少能达到完美的功能恢复，严重影响患者及家属的心身健康及生活质量。随着干细胞研究的深入，利用骨髓干细胞对脊髓和颅脑损伤的治疗频频见于文献报道，但利用干细胞进行外周神经损伤的治疗报道较少。本研究旨在通过动物实验和分子生物学技术观察DPSCs与TGF-β_3联合干预对于面神经损伤的修复效果，并探讨其作用机制，为治疗面神经损伤提供新的方法。 方法： （1）从新西兰幼兔前牙及磨牙牙髓组织中分离DPSCs进行体外培养，测定细胞克隆形成率、生长曲线、细胞爬片行HE染色、抗Vimentin、抗osteonectin、抗DSP、抗CD44免疫组化染色，鉴定DPSCs的增殖能力和多分化潜能的生物学特征。

（2）12只普通级瞬目反射正常的成年健康新西兰大白兔，面部两侧自身对照，随机分为自身正常对照组和上颊支缺损模型组，各组l2侧。于建模后7d、14d分别行光镜、电镜组织病理学检测，结合动物行为学观察、神经电生理检测技术对面神经上颊支缺损模型进行评价。 （3）成年健康新西兰大白兔48只（共96侧面神经），随机抽取24只（共48侧面神经）右侧设为TGF-β_3+DPSCs实验组（共24侧面神经），左侧设为TGF-β_3对照组1组（共24侧面神经），另外24只新西兰大白兔（共48侧面神经）右侧设为正常对照组（共24侧面神经），左侧设为PBS对照组2（共24侧面神经），分别制作面神经上颊支7mm缺损、损伤局部硅胶管套接的动物模型。于术后1周、1月、3月分别行大体形态、光镜、电镜组织学观察、神经电生理检测、GFAP和S100免疫组织化学染色等检测。 Natural产品 Library细胞系 结果： 第一部分：1）原代培养的幼兔牙髓细胞多呈成纤维细胞样细胞，少数纺锤形或多角形，光镜下传代培养的细胞形态特点与原代培养无明显差异；从第1代到第3胞活率细胞数比分别为：94.7%、95.8%、95.2%；牙髓干细胞在低密度接种后能够形成克隆，幼兔牙髓细胞克隆集落形成率为10-21个/103细胞；2）幼兔牙髓细胞体外多次传代仍具有良好的增殖能力，24孔板计数法表明兔牙髓细胞潜伏期短，随后进入对数增长期，选取的第三代细胞均在五天达到对数生长期，约在第8天细胞达到平台期；细胞周期的测定结果为：G1期DNA含量占80.4%；G2期DNA含量占15.3%；S期DNA含量占4.3%；3）原代和次代克隆，免疫细胞化学对未经诱导的细胞进行表面标志物Vimentin、CD44、osteonectin、dsp鉴定，结果均为染色阳性。

已经 第二部分：1）12只实验动物建模过程均较顺利，术中面神经暴露良好，操作可重复性佳。切口均获得I期愈合，动物在研究期间未发生切口感染及并发症，无实验兔死亡，动物存活率100%，建模成功率达100%；2）建模后所有实验动物术侧均出现面神经麻痹症状，2周时术侧面部轻度萎缩，兔唇明显偏向健侧；术后2周面部胡须运动功能评分，术侧分值为0.25±0.05，与健侧分值4分比较，差异有统计学意义（t=-249.16，P＜0.05）；3）面神经电生理检测结果显示，建模后1周、2周时，实验兔健侧组正常面神经潜伏期为（1.47±0.42）ms，神经动作电位最大波幅为（11.32±5.36）mV；刺激术侧组面神经中枢侧断端，不能引起同侧上唇方肌收缩；实验兔术侧面神经动作电位均未能引出；4）健侧组面神经HE染色可见，正常面神经上颊支纤维呈长条形，排列整齐，髓鞘密集，无退变，神经外膜连续；手术组面神经断端可见神经纤维连续性中断，断端部分脱髓鞘改变，神经外膜松散，神经纤维肿胀，板状层结构疏松，轴突呈空泡状；5）电镜观察显示，正常面神经轴突排列整齐，均匀一致，髓鞘结构完整、厚度较均匀、呈致密板层排列，胞核清晰；术后1周模型组神经鞘膜解离，板状结构变得模糊以致消失形成椭圆形小体，出现神经纤维球，轴浆内呈低电子密度；术后2周模型组轴突明显肿胀，其内微管、微丝数目明显减少，线粒体肿胀呈空泡样，电子密度降低；神经纤维排列紊乱，神经外膜连续性中断板层脱离。 第三部分：1）术后3月大体形态观察发现，与对照组1、2比较，实验组再生神经直径与近、远端神经干相当，无神经瘤形成，外膜血管丰富，质地坚韧；2）HE染色，术后3月实验组神经纤维排列较整齐，胞核浓密，束间血管多；对照组1神经纤维萎缩，再生神经纤维较少，扭曲较明显，呈盘旋状；对照组2部分轴突消失，神经纤维排列紊乱、髓鞘厚薄不均；3）电镜结果显示实验组的再生纤维以有髓神经纤维为主，形态规则，髓鞘板层结构清晰，轴浆内细胞器丰富；对照组1再生纤维髓鞘发育稍差，有髓神经纤维形态较规则，轴浆内细胞器较丰富；对照组2再生纤维髓鞘发育不良，板层结构紊乱，有髓神经纤维形态不规则，可见到变性的神经纤维；4）图像分析显示，实验组再生神经纤维总数多于其他两个对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；实验组再生神经纤维直径远远大于其他两个对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；实验组再生神经髓鞘厚度远远大于其他两个对照组，差异有统计学意义（P＜0.

5-8cm。镜下主要显示3种组织学类型:以黏液、血管、炎细胞为主的黏液型;以束状排列梭形细胞为主的细胞密集型;以致密成片的胶原纤维为主的纤维型。5例中3例以黏液型为主伴部分细胞密集型区域,2例以细胞密集型为主伴灶状纤维型和黏液型区域。全部病例见淋巴浆细胞浸润。1例局部核分裂数>5个/10HPF,其余核分裂数1-2个/10HPF。未见核异型性或坏死。免疫组化染色显示5例均呈平滑肌蛋白(smooth muscle atin,SMA),Vimentin和间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)阳性表达,1例局灶见Desmin阳性表达,而S-100、CD34、CD117、CD21、CD35、CD68均阴性。随访2-5年,1例复发,其余无复发或转移。结论胃IMT是一种具有中间性生物学行为的肿瘤,保守治疗预后良好。
经3年多临床攻关,复旦大学附属肿瘤医院陈海泉教授领衔的课题组,发明了一种能快速准确检测携带”ALK融合基因”的肺癌分子诊断技术,可为患者节省巨额检测费用,并为晚期肺癌患者选择”有特效的”分子靶向药物进行个性化治疗赢得宝贵时间。相关论文已发表在最近出版的国际著名肿瘤学期刊《临床癌症研究》上。
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目的:探讨非小细胞肺癌(non-small

selleck化学 cell lung cancer,NSCLC)组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)及其磷酸化水平与患者临床生物学特征、临床治疗疗效间的关系。方法 :收集NSCLC患者75例,采用免疫组化检测其肿瘤组织中EGFR和磷酸化EGFR(p-EGFR)的表达水平,分析其与肺癌生物学特征及疗效间的关系。结果:本研究NSCLC患者的肿瘤组织中EGFR表达阳性率达78.67%,p-EGFR阳性率为56.00%,均明显高于癌旁肺组织;EGFR表达水平与肿瘤细胞的分化程度有关,而p-EGFR表达水平与肿瘤细胞的分化程度、淋巴结转移及临床分期均密切相关,低分化肿瘤细胞、发生肿瘤转移者的肿瘤组织、晚期肿瘤组织中的p-EGFR表达水平均明显升高。同时,p-EGFR水平与NSCLC患者临床治疗的有效率密切相关,p-EGFR表达阴性的患者其治疗有效率明显高于阳性者。结论:EGFR的磷酸化形式在判断NSCLC疾病进展及临床疗效时可能更有实用意义,在评估NSCLC患者的临床疗效及预后判断中具有一定价值。
正如美国癌症研究协会(AACR)的年会已实际成为肿瘤基础研究的国际年会一样,美国临床肿瘤学会(ASCO)的年会,也早已演变为肿瘤临床研究的国际年会。每到春末夏初,气候宜人之际,各国临床肿瘤研究人员即纷纷启程前往美国著名的风城芝加哥,开始他们的又一轮征服癌症的麦加之旅。跨国药企巨头和崭露头角的生物制药公司也借机云集于此,展示其最新产品和临床试验结果。美轮美奂的商业展台让人目
美国临床肿瘤学会大会近期在美国芝加哥召开。在6月5日会议上,多家制药商和研究机构发布新药物,对治疗癌症提出新观点,一些药物获得临床好评,一些疗法成为未来治癌方向。

肺癌是全球癌症死亡的主要原因,仍是肿瘤科最大的挑战之一。尽管早期手术、放化疗和靶向治疗等治疗方式不断改进,使约20%的患者有根治性治疗的机会,但肺癌患者的5年生存率仍仅有15%。随着肿瘤免疫治疗研究的不断发展,发现癌症疫苗通过激活T、B淋巴细胞,增强免疫应答来清除肿瘤细胞,从而达到治疗癌症的目的。对于靶向黏蛋白-1(MUC-1)抗原表位的疫苗已经进行大量的临床研究,并取得了突破性进展。本文将围绕MUC-1疫苗治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的研究进展作一综述。
目的研究白花蛇舌草注射液联合GP方案治疗晚期非小细胞肺癌及对患者免疫功能的影响。方法选择晚期非小细胞肺癌患者80例为研究对象,随机分成两组,各40例。对照组采用GP方案治疗;观察组采用白花蛇舌草注射液联合GP治疗方案。观察两组患者疗效,中医证候情况,生活质量情况,免疫功能,不良反应及血管内皮生长因子(VEGF)含量,并做比较分析。结果

通常 www.selleckchem.cn/products/ON-01910.html 3个疗程后观察疗效,观察组中医证候改善有效率90.00%、卡氏评分增加稳定率97.50%,高于对照组的55.00%和67.50%,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。观察组CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+含量均高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.01);观察组胃肠道症状、白细胞减少等轻于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05);观察组VEGF水平低于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.01)。结论白花蛇舌草注射液联合GP方案治疗晚期非小细胞肺癌患者疗效显著,能够改善患者生活质量。
目的探讨氨柔比星联合顺铂治疗初治广泛期小细胞肺癌患者的疗效和不良反应。方法 4例初治广泛期小细胞肺癌患者给予氨柔比星+顺铂全身化疗6个周期,观察其疗效和不良反应。结果 4例患者中3例最佳疗效达部分缓解;1例疗效为疾病进展。最长随访66个月,1例患者目前仍在随访中。平均无疾病进展时间为19.6个月,平均总生存期为26.

无内毒素糖基化修饰的白蛋白(脂蛋白)制备与鉴定 1.无内毒素AGE-HSA的制备与鉴定 按文献方法体外制备无内毒素AGE-HSA修饰蛋白。将1.75g/L纯化的HSA分别置于含或不含0.1mol/L D-葡萄糖的0.4M磷酸盐缓冲液中,37℃孵育8周；用pH7.4磷酸盐缓冲液透析以除去葡萄糖。以在同样条件下不含葡萄糖的缓冲液中孵育8周的HSA作为对照,用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌消毒后,制备的样本经荧光分光光度分析法鉴定,4℃无菌保存。所有制备AGE-HSA和未经修饰的HSA经鲎试验法检测内毒素含量均低于0.25EU/ml。 {Selleck Anti-infection Compound Library|Selleck Antiinfection Compound Library|Selleck Anti-infection Compound Library|Selleck Antiinfection Compound Library|selleck Anti-infection Compound Library|selleck Antiinfection Compound Library|selleck Anti-infection Compound Library|selleck Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|buy Anti-infection Compound Library|Anti-infection Compound Library半抑制浓度|Anti-infection Compound Library价格|Anti-infection Compound Library花费|Anti-infection Compound Library溶解度|Anti-infection Compound Library购买|Anti-infection Compound Library制造商|Anti-infection Compound Library查找购买|Anti-infection Compound Library订单|Anti-infection Compound Library mouse|Anti-infection Compound Library chemical structure|Anti-infection Compound Library分子量|Anti-infection Compound Library molecular weight|Anti-infection Compound Library数据表|Anti-infection Compound Library supplier|Anti-infection Compound Library体外|Anti-infection Compound Library细胞系|Anti-infection Compound Library concentration|Anti-infection Compound Library nmr|Anti-infection Compound Library体内|Anti-infection Compound Library clinical trial|Anti-infection Compound Library cell assay|Anti-infection Compound Library screening|Anti-infection Compound Library high throughput|buy Antiinfection Compound Library|Antiinfection Compound Library半抑制浓度|Antiinfection Compound Library价格|Antiinfection Compound Library花费|Antiinfection Compound Library溶解度|Antiinfection Compound Library购买|Antiinfection Compound Library制造商|Antiinfection Compound Library查找购买|Antiinfection Compound Library订单|Antiinfection Compound Library chemical structure|Antiinfection Compound Library数据表|Antiinfection Compound Library supplier|Antiinfection Compound Library体外|Antiinfection Compound Library细胞系|Antiinfection Compound Library concentration|Antiinfection Compound Library clinical trial|Antiinfection Compound Library cell assay|Antiinfection Compound Library screening|Antiinfection Compound Library high throughput|Anti-infection Compound high throughput screening| 2.无内毒素AGE-LDL的制备与鉴定 根据文献方法,将购买的LDL(2 mg protein/ml)和0.2M D(+)-glucose,以及抗氧化剂(1mg/ml EDTA和10μM BHT)混合均匀,无菌的氮气条件下,37℃孵育4周。制备出AGE-LDL在4℃,pH7.4无内毒素的PBS中透析24小时,用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌后4℃保存。制备的AGE-LDL与LDL比较(以LDL为标准)。使用trinitrobenzene sulphonic acid assay (TNBS法)检测游离蛋白含量(AGE-LDL

0.72±0.032AU VS. LDL 1.00±0.001AU, P0.05);琼脂糖凝胶电泳迁移率实验(AGE-LDL 1.18±0.32 VS. LDL 1.00±0.000, P>0.05);以上实验表明AGE-LDL制备成功。所有制备AGE-LDL和未经修饰的LDL经鲎试验法检测内毒素含量均低于0.25EU/ml。 二.人肾小管上皮细胞(HK-2细胞系)的培养

人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞系)细胞购自美国ATCC库。细胞复苏后在37℃,5%CO2的条件下,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养细胞,待细胞长至70%-80%时,改用无血清培养基静置细胞16-24小时后用于实验。本研究使用6-10代细胞进行实验。倒置显微镜下观察细胞形态为铺路石样。 三.人肾小管上皮细胞系TLR-4受体的检测和定位 1.流式细胞仪检测肾小管上皮细胞上细胞膜TLR4受体 收集处于对数生长期的HK-2细胞,固定后封闭后,加入兔抗人TLR4一抗过夜,用非免疫羊IgG作阴性对照,FITC荧光标记的兔抗山羊二抗避光孵育,PBS重悬细胞后,流式细胞仪检测。 2.免疫荧光检测肾小管上皮细胞上细胞膜TLR4受体 人近端肾小管细胞上皮(HK-2细胞)培养于置有盖玻片的培养板上,待细胞生长至约70%融合,固定封闭后,加入兔抗人TLR4一抗过夜,用非免疫羊IgG作阴性对照,FITC荧光标记的兔抗山羊二抗避光孵育,碘化丙啶(PI)室温避光孵育染核,缓冲甘油封片。在荧光显微镜下观察、拍片。 四.AGE-LDL等诱导人肾小管上皮细胞表达IL-6和IFN-β 人近端肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入LDL(100μg/ml). HSA(100μg/ml).AGE-LDL(100μg/ml)和AGE-HSA(200μg/ml)刺激6小时,提取mRNA,qRT-PCR检测IL-6和IFN-β。或者刺激12小时,集细胞上清,按试剂盒说明,ELISA法检测IL-6在细胞上清中的浓度。 五.AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞表达IL-6的时间、浓度效应 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入25、50、100μg/mlAGE-LDL或100μg/ml未经修饰的LDL,于0、3、6、12及24小时收集细胞提取总RNA,行qRT-PCR检测IL-6 不 时间 mRNA。或者收集细胞上清,按试剂盒说明,ELISA法检测IL-6在细胞上清中的浓度,并以细胞总蛋白量矫正。 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入或不加入10μg/ml多粘菌素B(PMX-B),孵育2小时候加入100μg/ml AGE-LDL或10gg/ml LPS,6小时后收集细胞提取总RNA,行qRT-PCR检测IL-6 mRNA。 六.TLR4介导AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞表达IL-6 1.TLR4 siRNA干扰后,AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞表达IL-6的变化 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用TLR4 siRNA 100pmol有效干扰后,分别加入LDL(100μg/ml)、AGE-HSA(200μg/ml)和AGE-LDL(100μg/ml),6小时后收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测。 2.TLR4中和抗体阻断后,AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞表达IL-6的变化

人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入5μg/ml.1 Oμg/ml.20μg/ml兔抗人TLR4抗体或20μg/ml同源非免疫的兔IgG抗体,预孵2小时后,分别加入100μg/mlAGE-LDL,6小时后收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测。 3.阻断或中和TLR4受体,可以减少AGE-LDL诱导的HK-2细胞分泌IL-6 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别和TLR4中和抗体20μg/ml预孵2小时或者使用TLR4 SiRNA 100pmol干扰48小时后,加入AGE-LDL 100μg/m1孵育12小时,ELISA检测细胞上清中的IL-6蛋白的水平,并以蛋白浓度校正。 4. AGE-LDL对人肾小管上皮细胞TLR4表达的影响 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入100μg/ml AGE-LDL于0、1、3、6、12及24小时收集细胞。Western-blot检测TLR4蛋白表达情况。 七.AGE-LDL对人肾小管上皮细胞TLR4和下游Myd88/TRIF蛋白的影响 1. AGE-LDL对人肾小管上皮细胞Myd88和TRIF表达的影响 人肾小管细胞上皮(HK-2细胞)分别加入100μg/ml AGE-LDL于0、5min、15min、30min、1h、3h及6小时收集细胞。Western-blot检测Myd88和TRIF蛋白表达情况。 2. Myd88/TRIF siRNA干扰后,AGE-LDL诱导人肾小管上皮细胞IL-6 mRNA 肾小管细胞上皮(HK-2细胞)使用Myd88/TRIF siRNA 100pmol有效干扰后,分别加入100μg/ml AGE-LDL或10μtg/ml LPS,6小时后收集细胞,提取总RNA,行RT-PCR检测。 3.

Furthermore,Western blot analysis showed that the expres-sion of phosphorylated ERK was increased by silibinin,the expression of phos-phorylated p38 MAPK was decreased and total ERK,p38,JNK and phosphory-lated JNK MAPK did not change after treatment with both isoproterenol andsilibinin.Furthermore,pretreatment of cardiac myocyte with PKC,Ras and Rafinhibitors significantly

blocked ERK phosphorylation.Conclusion:Silibinin issuggested to protect isoproterenol-induced rat cardiac myocyte apoptosis byactivating the tyrosine kinase pathway,PKC 或者 and MAPK pathways.
Aim:To investigate the effect of icariin on the expression of peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator-1 alpha (PGC-1 α),peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARα),and nuclear

respiratory factor 1 (NRF-1) oncardiomyocyte differentiation of murine embryonic stem (ES) cells in vitro.Methods:The 这个 cardiomyocytes derived from murine ES cells were verified byimmunocytochemistry using confocal laser scanning microscopy.Cardiac-specific sarcomeric proteins (ie α-actinin,troponin T) were evaluated when em-bryoid bodies (EB) were treated with icariin or retinoid acid.The expression ofPGC-1α,PPARα,and NRF-1 were analyzed using both semiquantitative RT-PCRand Western blotting in cardiomyocyte differentiation.The phosphorylation ofthe p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) was studied in the differentia-tion process,and its specific inhibitor SB203580 was employed to confirm thefunction of the p38 MAPK on icariin-induced cardiac differentiation.Results:The application of icariin significantly induced the cardiomyocyte differentiationof Alisertib EB as indicated by the promoted expression

of α-actinin and troponin T.Theexpression of PGC-1α,PPARα,and NRF-1 increased coincidently in early differ-entiation and the increase was dose-dependently upregulated by icariin treatment.The phosphorylation of the p38 MAPK peaked on d 6 and decreased after d 8,andthe activation was further enhanced and prolonged when the EB were subjectedto icariin,which was concurrent with the elevation of PGC-1α,PPARα,and NRF-1.Moreover,the inhibition of the p38 MAPK pathway by SB203580 efficientlyabolished icariin-stimulated cardiomyocyte differentiation and resulted in the cap-ture of the upregulation of PGC-1α,PPARα,and NRF-1.Conclusion:Takentogether,icariin promoted the expression of PGC-1α,PPARα,and NRF-1 duringcardiomyocyte differentiation of murine ES cells in vitro and the effect was partlyresponsible for the activation of the p38 MAPK.
Aim:To investigate the effect of aspirin on the apoptosis of cultured bovineaortic endothelial cells(BAEC)and the signal pathways involved in this process.Methods:BAEC were cultured and passaged in Dulbecco’s modified Eagle’smedium culture medium.

糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)是一个多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,不仅参与肝糖代谢过程,而且还参与Wnt和Hedgehog信号通路,通过磷酸化多种底物蛋白来调节细胞的生理过程。GSK-3抑制剂作为目前备受关注的小分子抑制剂,对治疗神经退化性疾病、癌症、Ⅱ型糖尿病具有潜在的疗效。本文针对已开发出的GSK-3抑制剂,对其结构、与蛋白的作用模式以及构效关系进行阐述,为进一步设计合理的药物先导化合物和特异性小分子化学探针提供有益的启示。
阿尔采末病(Alzheimers

不 disease,AD)是一种常见的慢性进行性精神功能衰退性疾病。近年来在AD的早期诊断和治疗方面有了很大发展。该文就AD的发病机制、早期诊断及治疗方面在近几年的进展作一综述。
目的:了解胰岛素受体介导的主要的信号传导途径与胰岛素抵抗的关系,总结胰岛素抵抗的药物治疗方法。方法:主要选择被Medline收录的外文文献和在国内核心杂志上发表的有关文献,就其内容进行分析、分类、归纳及总结。结果:胰岛素受体、胰岛素受体底物、磷脂酰肌醇-3-激酶及葡萄糖转运蛋白4信号传递关键分子受损是导致胰岛素抵抗的主要原因。α糖苷酶抑制剂、双胍类、噻唑烷二酮类药物等纠正胰岛素信号传导通路中的障碍,增加靶组织对胰岛素敏感性的措施,都是胰岛素抵抗的治疗方法。结论:胰岛素信号转导途径的任何一个环节受损均可导致胰岛素抵抗。影响胰岛素受体介导的信号传导的新药开发将成为改善胰岛素抵抗的新趋向。
糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)是一种多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是细胞内多种信号转导通路中的重要成分,不仅参与细胞内糖代谢过程而且还参与细胞增殖、细胞分化和细胞凋亡等多种重要生理过程。GSK-3活性受多种机制调节,其活性调节异常时可引起多种重大疾病如糖尿病、神经退行性疾病和肿瘤等。GSK-3已成为许多疾病治疗靶点,目前针对GSK-3靶点开发的抑制剂主要是ATP竞争性的小分子GSK-3抑制剂。本文对GSK-3、它与多种重要疾病发生的关系,以及目前开发的GSK-3抑制剂进行了综述。
局部缺血部位快速再灌注虽然保护了心肌,但也引起再灌注损伤。目前还没有减轻再灌注损伤的特效疗法,但近年来研究显示,G蛋白耦联受体(G

www.selleckchem.cn/products/JNJ-26481585.html protein-coupled receptor, GPCR)的激动剂、胰岛素和缺血后处理可以在各种实验条件和各类动物模型中有效抵抗再灌注损伤。这些干预手段启动的心脏保护机制可能包括激活再灌注损伤补救激酶(reperfusion injurysalvage kinase, RISK)途径、抑制糖原合酶激酶-3β(glycogen synthase kinase 3β, GSK-3β)以及抑制线粒体膜通透性转换孔(mitochondrial permeability transition

pore, mPTP)开放等。这些研究成果有利于开发治疗急性心肌梗死的有效临床手段。
糖原合成酶激酶-3(GSK-3)是20世纪70年代发现的一种调节糖原代谢的丝氨酸/苏氨酸类蛋白激酶。后来研究者们还发现它有多种其他的功能,包括通过wnt信号和
急性心肌梗死目前是临床致残和致死的主要原因,其根本解决方法就是恢复心肌的正常血液供应。随着经皮冠状动脉腔内成形术、冠状动脉溶栓术和冠状动脉旁路移植术的广泛应用,心脏缺血/再灌注损伤越来越受到关注。1986年Murry 为什么 等首先在犬心模型中发现缺血预处理现象,此后的大量研究证实可以应用预处理对抗缺血,再灌注损伤。2003年 Zhao 等首先在犬心模型中发现缺血后处理现象,并认为
缺血后处理(ischemic postconditioning)是近年来提出的一种新的心肌保护方法,即心肌缺血后在长时间的再灌注之前,进行的数次短暂再灌注/缺血的循环。实验证明后处理对缺血心肌确有显著的保护作用。挥发性麻醉药后处理也可以发挥同样的保护效应,其机制比较复杂,远未阐明,现就其保护作用的机制作一综述。
糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)属丝氨酸/苏氨酸类激酶,最早是作为一种能磷酸化并抑制糖原合成酶活性的蛋白激酶而被发现的。已发现在某些人类疾病中GSK-3的活性异常升高,如糖尿病、阿尔茨海默病及其他一些神经退行性疾病。现已找到了一些小分子GSK-3抑制剂主要是通过使GSK-3的丝氨酸位点磷酸化,从而抑制其活性。GSK-3活性被抑制后,能影响胰岛素信号传导、葡萄糖代谢及糖原的合成。因此开发GSK-3抑制剂已成为研究抗糖尿病药物的一个新思路。本文主要介绍GSK-3与糖尿病的联系及近年来GSK-3抑制剂在抗糖尿病作用方面的研究进展。
糖原合成激酶3(GSK3)是普遍存在于细胞内的一种丝/苏氨酸蛋白激酶,其活性受到磷酸化、结合蛋白、细胞内定位等机制的调节。GSK3底物众多,其功能与细胞的存活与凋亡,结构与能动性以及细胞内众多信号传导通路密切相关。GSK3的异常表达与阿尔采末病(AD)的发病机制、病理表现及治疗有着密切的关系。这为GSK3抑制剂开发成为治疗AD的药物提供了可能。GSK3已成为治疗AD药物作用的一个重要的潜在的靶点。
糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)GSK-3β是一种在真核生物体内广泛存在的丝/苏氨酸蛋白激酶.GSK-3β是Wnt/β-catenin、PI3K/Akt、胰岛素等多种信号通路的关键调节因子,并与多种疾病有关.最近人们发现,GSK-3β是通过使多种底物发生磷酸化来发挥生物学功能.主要就GSK-3β在肾脏疾病研究中的新进展作一综述,希望为探索各种肾脏疾病的发病机制以及寻找有效的治疗手段提供新视角.

5、15、30、60 mmol/L)处理后的EPCs凋亡率,挑出最佳浓度;使用高糖(30 mmol/L)和氧化应激拮抗剂Tempol、TNFR1受体拮抗MAB430共同作用,流式细胞仪检测细胞凋亡率;使用分子探针(DCFH-DA)检测不同糖浓度处理后EPCs的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)含量变化;使用Western blotting检测不同糖浓度和TNFR1受体拮抗MAB430处理EPCs后,其细胞表面TNFR1受体以及由其介导的细胞内信号通路相关蛋白(TRADD、TRAF2、RIP、NF-k

Bp65、Caspase3)表达的情况。结果:在使用M199培养基培养3天后,EPCs大部分贴壁,呈圆形,逐渐增大伸展,培养至7天后,细胞生长迅速,镜下可见其呈集落样生长,培养至14天后,观察可发现细胞出现“鹅卵石”样形态分布。通过激光共聚焦显微镜观察细胞可见经过Di PI3K抑制剂 I-ac-LDL处理后阳性的EPCs为红色荧光,结合了FITC-UEA-1后的EPCs为绿色荧光,双染法阳性的细胞为正在分化的EPCs,表明所培养的细胞为EPCs。在高糖刺激EPCs的早期(24-48h),高糖组与对照组之间比较,没有明显的凋亡增加,而随着高糖刺激时间的延长,即高糖刺激的晚期(72-96h),可以发现高糖刺激组与正常对照组比较,凋亡细胞数目增加,高糖组(15mmol/L,30mmol/L,60mmol/L)与对照组进行组内比较,具有统计学意义(P<0.01),同时在实验的早期,高糖组与对照组比较,ROS的值没有明显的增加,而随着刺激时间的延长,刺激的晚期(72h),发现高糖组ROS增加明显,与对照组比较,具有显著统计学意义(P<0.01),在刺激的早期和晚期,分别用Tempol、MAB430(TNFR1受体拮抗剂)处理后,发现与高糖组比较,早期ROS值没有明显的降低,而晚期ROS值有明显的降低,并且与高糖组比较,差异具有显著统计学意义(P<0.01),氧化应激拮抗剂Tempol、TNFR1受体拮抗剂MAB430在72h能够降低上述TNF凋亡信号通路相关蛋白的表达,蛋白表达量有统计学意义(P
背景：尿酸是人体内嘌呤代谢的最终产物,随着人们生活水平的提高、饮食条件的改善及环境与遗传因素的改变,高尿酸血症已成为威胁人类身体健康疾病之一。越来越多的流行病学研究发现尿酸的升高与心血管疾病、肾脏疾病以及代谢综合征等密切相关。研究发现尿酸可为一种抗氧化物质,生理浓度下的尿酸对内皮细胞可起到一定的保护作用,也有研究证实高浓度的尿酸也会转化为促氧化物质而对内皮细胞进行损害。那么轻度的尿酸升高是否也会影响内皮细胞的增殖及死亡,给予一定的氧化刺激后是否会加重内皮细胞的损伤,目前缺乏这方面的研究。通过对不同浓度的尿酸和氧化应激状态下尿酸升高对内皮细胞损伤机制的研究,期望有助于探讨临床无症状高尿酸血症或伴有高脂血症、糖尿病等造成氧化应激状态情况下尿酸升高是否要进行早期预防与治疗。目的：1)通过不同浓度的尿酸(UA)及H202刺激体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后的增殖情况,一氧化氮(NO)的合成,膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)的分泌,观察氧化应激状态下UA升高对血管内皮细胞功能的影响；2)通过观察氧化应激状态下不同浓度UA对HUVECs

Ruxolitinib小白鼠 p38MAPK蛋白表达的变化及使用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预后它们的改变,探讨p38MAPK信号通路是否参与氧化应激状态下UA对HUVECs损伤机制的研究。方法：1)以原代HUVECs 4-6代为实验对象,设立单纯尿酸组(0、4、6、8、10mg/dlUA)及尿酸+过氧化氢组(0、4、6、8、10mg/dl

Lonafarnib体内 UA+100μmol/l H2O2)两个实验组。2)UA及H202刺激HUVECs 24h后,通过CCK-8法检测HUVECs的活力,硝酸还原酶法检测细胞培养上清液中NO的含量,化学发光法测定超氧化物歧化酶(SOD)水平,硫代巴比妥法测定细胞膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)的含量；3) Western blot检测氧化应激状态下UA刺激HUVECs后p38MAPK蛋白的表达情况。结果：1)CCK-8结果测定显示：UA(8、10mg/dl)组HUVECs活力较对照组(0 mg/d1)有显著降低(P0.05,差异无统计学意义；2)氧化应激状态下不同浓度的UA随着UA浓度的升高,p-p38MAPK蛋白表达逐渐增强,且与对照组Omg/dl UA组比较,6mg/dl、8mg/dl、10mg/dl UA组p值均0.05,无统计学意义；3)加入p38MAPK特异性抑制剂SB203580后,氧化应激状态下的不同浓度UA组p-p38MAPK及p38MAPK蛋白表达均未有明显变化(p>0.05)；4)与对照组(8mg/dl UA组)相比,H202组及H202+UA+SB203580组p-p38MAPK和p38MAPK的蛋白表达p值均>0.

04; CI,1.68-2.47;p
热休克蛋白90（Hsp90）是一种广泛存在于细胞中的分子伴侣，参与调控细胞内多种生理过程，包括细胞周期调控、细胞生存、凋亡、激素和其他多种信号通路。研究表明Hsp90在恶性肿瘤的发生发展过程中发挥十分重要的作用，已经成为目前研究的热点和抗肿瘤治疗的良好靶点。 自第一个Hsp90抑制剂进入临床实验以来，目前已经有多个不同的Hsp90抑制剂处于临床研究阶段，如17-DMAG、17-AAG、IPI-504、BII021、STA-9090、SNX-5422等。

因为 实验室在前期研究中发现多硫代二酮哌嗪类化合物HDN-1在体外对多种肿瘤细胞具有明显的抑制活性，且对Hsp90ATPase具有一定的抑制作用，并引起Hsp90顾客蛋白EGFR的降解。这些提示HDN-1具有靶向Hsp90的作用，可能为一种新型Hsp90抑制剂。本论文旨在进一步阐明HDN-1靶向抑制Hsp90的分子作用，明确HDN-1是一种新型的Hsp90抑制剂，从而揭示HDN-1抗肿瘤的作用机制。 第一部分：HDN-1与Hsp90相互结合的研究 本部分实验首先通过表面等离子共振技术（SPR）研究HDN-1与Hsp90的相互作用，结果表明HDN-1可与Hsp90发生结合，解离常数KD=10.9μM；采用基于荧光偏振原理的Hsp90抑制剂筛选模型对HDN-1进行评价，结果HDN-1不能与GA竞争性结合Hsp90，表明HDN-1不能与Hsp90N-端结合；通过观察HDN-1对胰蛋白酶水解Hsp90蛋白指纹图谱的影响，发现HDN-1与Hsp90N-端抑制剂17-AAG的作用不同，表明HDN-1确实不是作用于Hsp90N-端；进一步考察HDN-1与17-AAG联合应用对H1975细胞增殖的抑制作用，发现两者联用具有单独相加作用，说明HDN-1可能作用于Hsp90C-端；最后应用计算机分子模拟对接技术研究了HDN-1与Hsp90的结合部位，结果表明HDN-1与Hsp90分子的C-端结合。综上，HDN-1可与Hsp90结合，并且可能与Hsp90C-端发生结合。 第二部分：HDN-1对Hsp90相关功能的影响 1．细胞内Hsp90顾客蛋白超过200个，抑制Hsp90会引起顾客蛋白的降解。Western Blot方法检测HDN-1作用于3种非小细胞肺癌株H1975、A549、HCC827细胞对Hsp90顾客蛋白的影响，结果表明HDN-1引起了3种细胞中Hsp90顾客蛋白EGFR、p-EGFR、Stat3、p-Stat3、Raf、Akt、p-Akt、Erk、p-Erk、CyclinD1的降解和活性抑制。HDN-1在0.1μM浓度下就能引起吉非替尼耐药细胞株H1975细胞Hsp90顾客蛋白的变化，相比其它2种细胞，H1975细胞对HDN-1的作用更加敏感。

2．缺氧是肿瘤生长中普遍存在的现象，缺氧环境与肿瘤的发生密切相关，HIF-1α是参与该过程的重要转录因子。Hsp90通过与HIF-1α的相互结合可以起到促进HIF-1α的正确折叠、维持其在缺氧环境下稳定性的作用。为进一步证明HDN-1具有抑制Hsp90的作用，通过Western 寻找更多 Blot方法考察HDN-1在缺氧条件下对H1975和A549细胞中HIF-1α含量的影响，结果表明HDN-1可以明显引起细胞内HIF-1α蛋白水平的下调。 3．研究显示，EGF介导的EGFR内吞降解与Hsp90密切相关，尤其是对发生突变的EGFR。该部分内容研究了HDN-1促进EGF介导的EGFR内吞降解的作用，结果发现：EGF可以诱导野生型EGFR的下调（A549细胞）但不能诱导突变型EGFR的下调（H1975和HCC827细胞），而HDN-1可以明显促进细胞中EGF介导的EGFR内吞降解，呈现剂量和时间依赖性，且对两种突变细胞中的EGFR作用更加明显，同时HDN-1也引起了3种细胞中p-EGFR（Tyr1045）含量上升，也具有剂量和时间依赖性，最后通过研究HDN-1对A549细胞中EGFR泛素化的影响，结果发现HDN-1引起A549细胞中EGFR泛素化增加。上述结果表明HDN-1通过抑制Hsp90的作用促进了EGF介导的EGFR内吞降解。 本部分实验表明，HDN-1引起三种细胞中多种顾客蛋白的降解具有剂量和时间依赖性，且对H1975细胞的作用最为明显，并且HDN-1引起HIF-1α蛋白水平的下调；HDN-1通过抑制Hsp90的作用促进了EGF介导的EGFR内吞降解，且对两种突变EGFR作用更加明显。综上，我们明确了HDN-1是一种新型Hsp90抑制剂，这也是首次发现多硫代二酮哌嗪类具有Hsp90的分子靶向作用。本文阐明HDN-1的Hsp90抑制作用揭示了HDN-1的抗肿瘤作用机制，也为今后进一步对这类化合物基于靶向Hsp90的分子优化与药物开发奠定了基础。
目的

或者 本课题组前期研究已经证明以趋化因子4为靶向的shRNA能够明显抑制卵巢癌SW626细胞CXCR4mRNA及蛋白的表达，抑制细胞增殖、迁移及侵袭能力。因此，本实验在前期研究基础上更深一步研究抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的分子机制。 方法 扩增含CXCR4-shRNA质粒及空质粒载体，利用阳离子脂质体转染法转染人卵巢癌细胞SW626细胞，本实验分为3组，干扰组（转染CXCR4-shRNA的SW626细胞）、空载体组（转染空载体的SW626细胞）及空白对照组（不给予任何处理的细胞），转染48小时后，于倒置荧光显微镜下观察转染效率；利用酶标仪结合JC-1法检测肿瘤细胞线粒体膜电位的变化，采用实时定量RT-PCR法检测ASK1mRNA的表达情况。细胞免疫化学和/或Western Blot检测Caspase-3、EGFR、ERK1/2、p-C-Jun、Akt、TNF-α、NFκBp65、IκB-α蛋白的表达水平。 结果 1.转染48小时后在倒置荧光显微镜下观察转染效率：当细胞处于对数生长期，状态良好，细胞汇合度达90%左右，按脂质体与质粒之比为1:1的比例进行转染，转染效率达到最高，人卵巢癌细胞SW626细胞的转染效率可达80%左右。 2. JC-1法检测转染前后干扰组与空白对照组及空载体组相比，线粒体膜电位普遍降低（P<0.001），差异有统计学意义（P<0.