Western-blot证实胃泌素、曲妥珠单抗可协同下调SGC7901细胞中p16、AE1、CyclinD1、β-catenin蛋白表达,上调AE2蛋白,降低胞浆内p16蛋白并促进其入核。 5.裸鼠荷瘤实验显示胃泌素、曲妥珠单抗在体内亦有协同抗肿瘤作用,荷瘤免疫组织化学染色显示联合用药组细胞膜CCKBR蛋白表达较单药组明显增多,荷瘤组织提取蛋白做Western-blot示胃泌素、曲妥珠单抗在体内亦协同下调p16、AE1、CyclinDl蛋白、上调AE2蛋白,与体外实验结果一致。 结论： 1.胃泌素、曲妥珠单抗的体内、体外实验均证实对胃癌有协同抗肿瘤作用,并首次发现曲妥珠单抗在HER2阴性的胃癌细胞中同样具有协同抑癌作用。 2.胃泌素、曲妥珠单抗协同上调CCKBR蛋白表达并促进其膜定位,上调的CCKBR与胃泌素相结合启动并放大对下游信号分子的影响可能是胃泌素与曲妥珠单抗协同抗肿瘤增殖的关键环节。

3.上调的CCKBR与胃泌素结合后可影响AE1/p16/AE2复合体,使胞浆内p16减少、入核增加,AE1下调,AE2上调,细胞酸化,Wnt/β-catenin通路失活,CyclnD1下降,最终阻滞细胞于G1期从而抑制肿瘤细胞增殖。
目的：探讨mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1在新疆维、汉乳腺癌组织中的分子病理学机制。方法：随机选取285例于2005年3月-2009年9月期间就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的维吾尔族、汉族女性浸润性乳腺癌患者,检测磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达状况,分析其与各临床指标之间的关系及对预后的影响；选取46对维、汉新鲜乳腺癌组织和癌旁组织样本,使用免疫印记(Western-blot)蛋白方法检测磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达情况,并测定其相对定量。选取63对维、汉新鲜乳腺癌组织和癌旁组织样本,检测mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1mRNA的表达情况,并与蛋白检测的结果进行对照。结果：p-mTOR的表达阳性率分别是72%(206/285)和60%(170/285),,p=0.001；p-4EBP1的表达阳性率分别是26%(74/285)和8%(24/285),,p=0.000；p-S6K1的表达阳性率分别是42%(120/285)和18%(50/285),p=0.000,p值均小于0.01,差别均有显著统计学差异。三指标与各临床指标的单因素分析显示均与无病生存率无明显统计学差异,多因素分析显示不同民族(p=0.000)、BMI指数(p=0.048)、ki-67的表达(p=0.004)以及p-S6K1的表达(p=0.000)与无病生存率相关。无病生存的Log

selleck激酶抑制剂 已经 Rank检验的X2值分别为0.274,0.920和0.144,p值分别为0.619,0.337和0.704, p-mTOR、 p-4EBP1、p-S6K1的表达与无病生存率之间无明显统计学差异。在维吾尔族和汉族乳腺癌组织中,p-mTOR的表达阳性率分别是54%和46%(p=0.067), p-4EBP1的表达阳性率分别是62%和38%(p=0.020), p-S6K1的表达阳性率分别是49%和51%(p=0.695)。荧光定量rtPCR结果显示,mTORmRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的2-△△ct平均值分别是14.83、19.78, t=-1.376, p=0.174; S6K1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的2-ΔΔct平均值分别是66.06,87.51, t=-1.15, p=0.254;4EBP1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均值分别是12.70、10.33,t=0.379,p=0.706,三者差异均无明显统计学意义(p>0.05)。维、汉乳腺癌组织中mTORmRNA2－ΔΔct平均值分别为10.88和19.7,差异有统计学意义(p=0.045),4EBP1mRNA2－ΔΔct平均值分别为52.72和80.74,差异无统计学意义(p=0.128),S6K1mRNA2-－ΔΔct平均值分别为7.97和17.92,差异无统计学意义(p=0.404)。结论：mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌组织中被显著激活。磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1表达的调控位点可能位于转录后水平或蛋白质水平。p-4EBP1在维吾尔族中的表达显著升高,可能成为研究维、汉不同民族之间乳腺癌差异的原因之一。维、汉之间mTOR及其下游分子mRNA与磷酸化蛋白检测的结果不一致,因而mRNA的检测不能代表维、汉乳腺癌中mTOR信号通路的激活状态。

Nintedanib体内 第一部分：mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌中的表达和临床意义 目的：探讨磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌组织和癌旁组织中的表达部位、表达量以及蛋白表达的相关性。探讨磷酸化mTOR、4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌患者当中与各临床指标以及预后的关系。方法：随机选取285例于2005年3月-2009年9月期间就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的维吾尔族、汉族女性浸润性乳腺癌患者,使用免疫组化检测磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达状况及其相互关系,以及与各临床指标之间的关系及对预后的影响；选取46对维、汉新鲜乳腺癌组织和癌旁组织样本,使用免疫印记检测mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达情况,并测定其相对定量,分析mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的相互关系。结果:p-mTOR表达阳性率分别是72%(206/285)和60%(170/285), p=0.001; p-4EBP1的表达阳性率分别是26%(74/285)和8%(24/285),p=0.000；p-S6K1的表达阳性率分别是42%(120/285)和18%(50/285),p=0.000,p值均小于0.01,差别均有显著统计学差异。p-mTOR在癌组织与癌旁组织中定位表达未见明显统计学差异(p=0.554); p-4EBP.1和p-S6K1在癌组织和癌旁组织中的定位表达有显著统计学差异(p分别为0.001和0.000)。Western-blot结果提示p-mTOR、p-4EBP1和p-S6K1在癌组织中表达的灰度平均值均高于癌旁组织(P值分别为0.001、0.725和0.473)。p-4EBP1在维、汉民族之间的表达有统计学差异(p=0.020,r=0.138), p-S6K1的表达存在组织学分级之间的差异(p=0.029,r=0.044), p-mTOR和p-S6K1与ki-67的表达存在统计学差异(p值分别为0.028和0.011,r值分别为-0.130和-0.151)。三指标与各临床指标的单因素分析显示均与无病生存率无明显统计学差异,多因素分析显示不同民族(p=0.000)、BMI指数(p=0.048)、ki-67的表达(p=0.004)以及p-S6K1的表达(p=0.

应用滤过性手术建立兔滤过道瘢痕化动物模型,选用24只健康新西兰白兔作为实验动物,随机分为3组：对照组、ALK5组、0.5mM SB-431542组。在全身麻醉下行左眼滤过性手术。术后观察、测量眼压(intraocularpressure,IOP)。术后第3、7、14、28天4个时间点各处死每组2只实验兔,摘除眼球,制作切片,免疫组化染色,光镜下观察滤过道α-SM-actin、ALK5及瘢痕化情况。2.对30只健康的新西兰白兔施行右眼滤过性手术。随机分为5组,对照组(NS+NS)、阴性对照组(NS+0.5mM SB-431542组)、高表达组(ALK5转染+NS)、高表达+低剂量给药组(ALK5转染+0.5mM SB-431542组)和高表达+高剂量给药组(ALK5转染+2.0mM SB-431542组),每组6只兔(6只眼,n=6)。术后观察并测量眼压。术后第28d处死实验兔,摘除实验眼,制作切片,免疫组化染色,检测a-SM-actin、ALK5及瘢痕化情况。

ISRIB订购 结果： 第一部分：贴壁法培养的人结膜下Tenon’s囊组织,约3-5天可见组织块周围爬出梭形细胞,继续培养逐渐汇合成片,经传代后进行波形蛋白(vimentin)染色,鉴定为成纤维细胞。TGF-β1诱导HTF后,ALK5的mRNA表达有所上调,于12-24h达到高峰值。Western Blot显示蛋白表达水平也有所升高,于24-36h达到高峰值。细胞免疫荧光染色检测也同样显示,ALK5表达水平升高。 第二部分：实验成功构建了过表达ALK5基因的慢病毒载体,并获得了较高滴度的病毒液。采用慢病毒转染HTF细胞后,观察发现细胞增殖速度明显增加,并伴有凋亡现象,加入SB-431542后细胞生长速度及凋亡现象均有所逆转。MTT实验显示,转染GFP病毒的细胞与未转染的HTF细胞增值速度无明显变化,转染ALK5病毒的HTF细胞,增殖速度明显增加,而在培液中加入SB-431542后,细胞增殖速度明显降低。转染后,过表达ALK5的细胞,表达a-SMA以及FN蛋白水平有所下降,而加入ALK5抑制剂SB-431542后,该过程可被抑制。 点击此处 第三部分：1.兔滤过性术后术眼的眼压各组均有所下降,术后第1天,平均IOP为5.63±1.73mmHg,P0.05。之后兔眼眼压稍有上升趋势,术后28d,眼压相对术前稍有上升,为12.40±1.16mmHg,P
研究目的：

1.阐明P44/WDR77在肿瘤细胞生长过程中的重要作用 2.研究肿瘤细胞及增生活跃的细胞逃逸TGFβ生长抑制作用的机制 研究方法： 通过慢病毒表达针对P44的shRNA而抑制其正常表达。本实验所涉及的不同的肿瘤细胞系均在表达非靶向shRNA或者P44shRNA后,以2000/孔的密度铺24孔板,每天计数,持续7天,得到生长曲线。通过Western Blot法检测P44, HSP90β, actin, c-Myc, c-Jun, Smad3, Smad3-pS425等目的蛋白的表达情况。通过DNA microarray和RT-PCR方法了解TGF β信号通路下游目的基因的表达情况。构建包含有4个串联Smad反应元件(SBE, GTCTAGAC)的荧光素酶报告质粒(pGL3-4xSBE-E4-luc),使用PC3细胞进行报告基因检测。免疫染色法检测小鼠肺组织切片,全层皮肤切片以及人肺癌组织切片中P44, TGFβ, TβRⅡ以及Smad3的表达情况。 结果： 1.抑制P44的表达能够明显抑制多种肿瘤细胞的生长,包括：肺癌(A549),前列腺癌(PC3),胰腺癌(ASPC-1,

PANC-1),乳腺癌(MDA MB231),结肠癌(HCT116)及黑色素瘤(WM2664)； 2.抑制P44的表达能够明显导致Smad2/3的磷酸化及向细胞核内的转运,TGFβ通路的部分目的基因的转录活性提高,同时TGFβ2和TGFβ RⅡ的蛋白表达量也明显升高； 3.在A549细胞中,当培养基中TGFβ2的浓度达到0.1ng/ml时可以观察到明显的Smad3向细胞核内的转运现象。但是当A549细胞的P44表达被抑制后,TGFβ2的浓度只需要0.001ng/ml即可观察到相同的现象。随着P44表达的抑制,TGFP2对于A549和PC3的生长抑制效应也得到了明显的增高； 而且 4.在小鼠皮肤再生过程中,P44的表达从第5天起明显升高,和角质细胞的增殖相一致。而当在切口愈合后(第7天后),P44的表达逐渐局限于基底部,此时也只有这部分的细胞处于增殖状态。在整个切口全层均能发现TGFβ的存在,但是在P44表达的增殖活跃区域,Smad3并未向核内发生聚集。而在不表达P44的区域,可以看到TβRⅡ的表达以及Smad3向细胞核内转运的情况； 5.对肺癌组织切片染色,发现P44在恶性增殖部分高表达,而在正常的肺组织结构中未表达。在正常区域和增生区域均有TGFP的表达,但是TβRⅡ的表达以及Smad3的核内聚集现象在正常区域更加明显。 结论： 1.P44/WDR77的表达是多种肿瘤生长所必须的； 2.抑制P44/WDR77的表达能够激活TGFβ信号通路,并且P44/WDR77的表达通过抑制TGFβ2和TβRⅡ的表达而限制了TGFβ信号通路的作用； 3.

氢饱和生理盐水的制备：利用氢气发生器生产高压氢气，再将高压氢气通入氯化钠溶液中达到饱和浓度即可，现制现用。2.大鼠重症急性胰腺炎相关性肺损伤模型的建立及处理：将54只健康SD雄性大鼠随机分成假手术组（Sham组）、模型组（SAP+NS组）和氢水处理组（SAP+H2组），各组再分成6h、12h、24h三个时间点，每个时间点6只大鼠。Sham组大鼠开腹翻动胰腺数次后随即关腹，不作其他处理，SAP+NS组和SAP+H2组以5%牛磺胆酸钠（1ml/kg）经胆胰管开口逆行注入（0.1ml/min）建立模型，在建模成功后1h经尾静脉分别注射等量的生理盐水或氢饱和生理盐水(5ml/kg)。各组分别在6h、12h、24h三个时间点处死大鼠，收集血清、肺组织及胰腺组织。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清TNF-α、IL-1β含量；分光光度计法测定肺组织中髓过氧化物酶（MPO）的活性；荧光定量PCR法检测肺组织中TNF-α-mRNA、IL-1β-mRNA的表达；Western

NLG919 blot法检测肺组织中P-JNK蛋白的表达；用肺组织湿干重比,反映肺脏水肿程度；并对胰腺组织、肺组织进行HE染色病理学检查。以上所得数据采用均数±标准差（X—±S）表示，运用SPSS17.0统计软件进行统计学分析；样本均数的比较采用方差分析；两者的相关性采用直线相关和回归分析，P＜0.05，则差异有统计学意义。结果：（1）SAP+NS组和SAP+H2组血清中TNF-α含量、肺组织中TNF-αmRNA表达水平、肺组织中P-JNK蛋白的表达、肺组织湿干重比，在6h、12h、24h各个时间点均高于Sham组（P<0.05），SAP+H2组与SAP+NS组比较，SAP+H2组在各个时间点均低于SAP+H2组（TNF-α含量：204.1±8.5VS215.3±6.0，P<0.05；122.4±10.3VS263.2±7.4，P<0.05；84.1±8.6VS288.0±5.6，P<0.05；2.51±0.11VS4.40±0.24，P<0.05；1.77±0.06VS6.00±0.37，P<0.05。P-JNK蛋白的表达：11.29±0.01VS11.77±0.01，P<0.05；10.59±0.02VS12.73±0.01，P<0.05；9.43±0.01VS14.12±0.01，P<0.05。肺组织湿干重比：3.7±0.2VS4.2±0.2，P<0.05；3.3±0.3VS4.9±0.2，P<0.05；3.2±0.2VS4.6±0.3，P<0.05），SAP+H2组与SAP+NS组比较，6h时无统计学差异，在12h、24h时SAP+H2组均低于SAP+NS组（IL-1β含量：80.3±8.3VS215.4±10.4，P<0.05；59.3±8.2VS254.3±8.6，P<0.05。胰腺和肺组织病理评分：7.5±1.1VS9.5±0.4，P<0.05；7.3±0.4VS9.8±0.3，P<0.05。4.6±0.2VS5.1±0.2，P<0.05；3.8±0.3VS6.3±0.4，P<0.05。MPO活性：3.3±0.2VS4.7±0.2，P<0.05；3.1±0.1VS4.9±0.2，P<0.05；1.29±0.03VS2.92±0.26，P<0.05）。（3）Person相关性分析表明肺组织中P-JNK蛋白的表达与肺组织损伤程度存在相关性。结论：1.经尾静脉注射氢饱和生理盐水对APALI有一定治疗保护作用。2.氢饱和生理盐水可能是通过其选择性抗氧化作用抑制JNK细胞信号通路的激活来实现对APALI的保护治疗作用。
目的

信号通路 探讨知母皂苷元（Sarsasapogenin, Sar）对高糖引起的海马神经元损伤是否有保护作用。 方法 选用出生0~24h的Sprague-Dawley(SD)大鼠乳鼠，无菌条件下取出大脑，动物解剖显微镜下分离出海马，剪碎后用0.125%胰蛋白酶消化，DMEM/F12培养基培养，培养7d的海马神经元用于实验。实验分两部分进行，第一部分研究不同浓度高糖对海马神经元的影响，实验分为五组：正常对照组：加入等量的培养基；高糖30mmol·L-1组，50mmol·L-1组和100mmol·L-1组，加入葡萄糖(30,50,100mmol·L-1)作用48h；甘露醇渗透压对照组，加入25mmol·L-1甘露醇和25mmol·L-1葡萄糖作用48h。应用MTT法检测不同浓度葡萄糖对海马神经元细胞活力的影响；Western

GDC-0199分子重量 blot法半定量分析不同浓度葡萄糖对海马神经元突触素蛋白表达的影响。第二部分研究Sar对高糖诱导的海马神经元损伤的保护作用，实验分为六组：正常对照组；高糖组（50mmol·L-1）；高糖+Sar (10,30,100μmol·L-1)，先加入Sar作用1h，然后加入高糖作用48h；单独Sar组，加入Sar（30μmol·L-1）作用48h。免疫荧光染色检测海马神经元突触素细胞内定位；Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变；Western blot法半定量分析Sar对高糖引起的海马神经元突触素、caspase-3及PARP蛋白表达水平的改变。 结果 形态学结果观察显示，刚刚种植的海马神经元胞体呈圆形，体积很小，折光性很强，均匀分布；培养1d后，大部分细胞伸出3-4个短小的突起，细胞几乎全部贴壁，其中有些细胞聚集成团；培养4d后，神经元胞体进一步增大，突起进一步增多并明显增长，连接形成交织的网状结构，神经元以多极神经元为主；培养7d后，细胞体积继续增大，胞体饱满，突起增长增粗，分支增多，形成致密的蜘蛛网结构。培养7d海马神经元，NeuN免疫荧光染色进行神经元纯度鉴定，经统计神经元纯度在90%以上。MTT实验结果显示，高糖（50和100mmol·L-1）环境可使海马神经元细胞活力及突触素蛋白表达较对照组明显降低。而相同渗透压的甘露醇对照组对神经元细胞活力及突触素蛋白表达均没有影响。而知母皂苷元（10,30,100μmol L-1）可明显对抗高糖引起的突触素蛋白表达的减少。Hoechst33258核染色结果显示，与对照组相比，高糖可使海马神经元凋亡细胞数明显增加，从正常对照组（8.144.18）%增加到（25.75.72）%。在加入高糖前1h，加入Sar（10,30,100μmol L-1）可明显对抗高糖引起的海马神经元凋亡，并呈明显浓度依赖性，凋亡百分率分别降至（19.415.35）%、（9.195.34）%和（8.484.

构建支气管上皮细胞（BEAS-2B cells）和中性粒细胞（Neutrophils；NEU）混合培养体系。2.探讨支气管上皮细胞与中性粒细胞相互作用时，诱导细胞表面粘附分子表达及细胞因子（IL-6、IL-8）分泌的机制。 方法：1.采用免疫磁珠阳选法分离纯化人外周血中性粒细胞，与支气管上皮细胞混合培养，构建实验体系。2.实验随机分成6组：①：单独培养的支气管上皮细胞组（BEAS-2B组）；②单独培养的中性粒细胞组（Neutrophils组）；③支气管上皮细胞和中性粒细胞混合培养组（BEAS-2B+Neutrphils组）；④混合培养并加入抑制剂SB203580组（B+N+SB203580组）；⑤混合培养并加入抑制剂MG-132组（B+N+MG-132组）；⑥混合培养并加入抑制剂SB203580和MG-132组（B+N+SB203580+MG-132组）。3.应用流式细胞术（FCM）检测BEAS-2B细胞和NEU细胞表面粘附分子（ICAM-1、ICAM-3和VCAM-1）的表达；应用westernblot技术检测BEAS-2B细胞内NF-KB及p38MAPK通路的激活；应用Real-timePCR法检测上述细胞中ICAM-1、ICAM-3和VCAM-1的基因表达；应用RocheCobas

而且 e411和ELISA技术检测细胞培养上清液中IL-6和IL-8的分泌。 结果:1.用免疫磁珠阳选法可以分离得到纯度>98%、活力>98%的中性粒细胞。2.BEAS-2B细胞表面粘附分子的表达：BEAS-2B细胞和NEU细胞混合培养，BEAS-2B细胞表面粘附分子ICAM-1、ICAM-3、VCAM-1的表达较其单独培养时明显增高；加入抑制剂后，三种粘附分子的表达均有明显减低；ICAM-3、VCAM-1对两种抑制剂的敏感程度并无明显差异，且未发现两种抑制剂间的相互作用；MG-132对ICAM-1的抑制作用明显强于SB203580，并且两种抑制剂联合使用可进一步降低ICAM-1的表达。3.中性粒细胞表面粘附分子的表达：BEAS-2B细胞和NEU细胞混合培养，中性粒细胞表面ICAM-1的表达较其单独培养时明显增高；加入抑制剂（SB203580、MG-132）表达量明显下降。4.与BEAS-2B细胞单独培养组相比，混合培养组BEAS-2B细胞ICAM-1、ICAM-3、VCAM-1的基因表达水平明显上调；与单独培养NEU细胞相比，混合培养组ICAM-1的基因表达水平也明显上调。5.western

blot结果显示BEAS-2B细胞与NEU细胞混合培养可以诱导BEAS-2B细胞体内Phospho-IKB及Phospho-P38MAPK蛋白的表达。6.BEAS-2B细胞与NEU细胞混合培养时，细胞培养上清液中IL-6的表达量明显增加，加入抑制剂（SB203580、 MG-132）均可抑制IL-6的分泌，且MG-132的抑制效果强于SB-203580，同时两种抑制剂联合使用有协同作用；.7. BEAS-2B细胞与NEU细胞混合培养，细胞培养上清液中IL-8的分泌无变化。 结论1.免疫磁珠阳选法可以分离得到高纯度、高活性的中性粒细胞。2.BEAS-2B细胞与中性粒细胞接触后相互作用可活化BEAS-2B细胞内NF-KB和P38MAPK通路，进一步诱导相关基因的表达，从而调控细胞表面粘附分子ICAM-1、ICAM-3、VCAM-1及炎症因子（IL-6）的表达。
目的：观察p38MAPK信号通路变化对小胶质细胞功能及细胞因子分泌的影响，探讨p38MAPK信号通路在小胶质细胞功能变化中的作用机制。 PLX4032 方法：以BV2细胞株（小鼠小胶质细胞瘤细胞）和PC12细胞株（大鼠嗜铬细胞瘤细胞）为研究对象，分别用其来代表小胶质细胞和神经元。在不同程度缺氧条件下培养BV2细胞，再用其培养液培养PC12细胞。通过CCK-8法测定PC12细胞存活率以此来评价BV2细胞功能；应用ELISA法检测不同状态下BV2细胞分泌TNFα、NGF和IL-1β的情况。在低氧培养BV2细胞的条件下将p38MAPK信号通路阻断剂（SB203580）加入到BV2细胞培养液中，测定阻断p38MAPK信号通路后BV2细胞的功能变化及TNFα、IL-1β、NGF的分泌情况。 结果：1、BV2细胞低氧培养1h分泌NGF、TNF-α和IL-1β的量分别为；215.81±13.11pg/ml、808.91±7.41pg/ml和7.89±0.47pg/ml，阻断p38MAPK信号通路后NGF分泌增多为376.25±11.67pg/ml，TNF-α和IL-1β分泌降低分别是544.85±8.13pg/ml和4.75±0.23pg/ml(p0.05)。

2、正常对照组PC12细胞存活率若按100%计算，损伤对照组细胞存活率为48.2%，低氧1h组细胞存活率为71.4%。与低氧1h组相比阻断p38MAPK信号通路后PC12细胞存活率上升，存活率为86.9%（p<0.01）。低氧12h组细胞存活率为29.6%。与低氧12h组相比阻断p38MAPK信号通路后PC12细胞存活率上升，为51.4%（p
目的：分别应用SB203580（吡啶异咪哒唑化合物）和6-AN（6-aminonicotinamide）作用于内皮祖细胞（endothelial 点击此处 progenitor cells EPCs）,观察大自噬标记物LC3-Ⅱ和分子伴侣介导自噬（CMA）的标记物LAMP-2A的变化情况，探讨CMA与大自噬的关系。 方法：1.密度梯度离心法分离SD大鼠的骨髓单个核细胞（bone marrow-derivedmononuclear cells, BMMNCs），EGM-2MV培养基诱导、培养、扩增骨髓源性EPCs并鉴定。倒置显微镜观察、MTT法检测EPCs增殖情况。2.在EPCs中加入不同浓度的SB203580（2.5uM、5.0uM、10uM、20uM、40uM）和6-AN（2.5mM、5.0mM、10mM、20mM、40mM），分别作用24小时。以MTT法观察药物对EPCs增殖的影响；FCM检测细胞凋亡情况；Western blot检测LC3-Ⅱ和LAMP-2A蛋白的表达情况；激光共聚焦观察细胞内LAMP-2A的变化。均数以（x±s）表示，采用单因素方差分析各组均数，（P＜0.05）有统计学意义，（P＞0.05）无统计学意义。 结果：1.Ficoll法分离的大鼠骨髓单个核细胞，经EGM-2MV培养基培养可在体外诱导分化为EPCs。2.SB203580在浓度为2.5uM时对EPCs增殖抑制作用不明显，5.0uM及以上时抑制作用较显著（P＜0.05）；6-AN浓度在2.5mM时对EPCs增殖促进作用不明显，5.0mM及以上浓度时有明显促进作用（P＜0.05）。3.SB203580在2.5uM时，细胞凋亡较少，5.0uM及以上时凋亡逐渐增多；6-AN各浓度组凋亡逐渐降低，在40mM时凋亡增高。4.

选择通过PCR扩增后确定的疤痕组织内有变化的PDGF-B作为切入点:

通过免疫组化,RT-PCR,Western Blot,细胞培养,RNA干扰,抗体封闭等技术来研究PDGF-BB在SCI中的作用和可能的作用机制。 【结果】 1.本实验成功建立了OEC、SC、NSC、BMSC和HSC的体外培养方法,并进行了鉴定。 2.运动功能评分:所有大鼠脊髓全横断后,双侧后肢完全瘫痪,不能排尿。大鼠靠前肢拖动身体前行。1周末时,手术损伤组大鼠双后肢开始出现1个后肢关节(踝关节)的轻微活动。细胞移植组则开始出现1或2个后肢关节轻微活动(多为膝关节或/和踝关节)。在第2周末时,手术损伤组和细胞移植组大鼠在细胞移植后排尿障碍均较第1周末时稍有好转,膀胱残余尿仍较多,手术损伤组部分大鼠开始出现2个后肢关节的轻微活动,而细胞移植组部分大鼠开始出现1或2个后肢关节大幅运动。各细胞移植组的大鼠BBB评分在整个恢复的过程中均有明显的提高,但变化最明显的的就是OECs+NSCs组。说明OEC+NSC移植对运动功能恢复明显改善。 因为 3.神经电生理感觉和运动诱发电位检测 3.1 CSEP检测 N1波变化:脊髓全横断组没有测到波形,潜伏期无限延长,与假手术组比较差异显著;说明手术切断脊髓后上行传导通路明显受损。细胞移植后,OEC、NSC移植组均分别能测到N1波,其与SCI组相比较,有显著性统计学差异(P=0.001,≤0.001、P=0.045,＜0.05)。但OEC+NSC移植组分别与OEC组和NSC组比较,均无统计学差异(P=0.720、0.323,＞0.05)。说明OEC+NSC移植对感觉神经生理功能恢复改善不明显。 P1波变化:脊髓全横断组亦没有测到波形,说明潜伏期无限延长,与假手术组比较差异显著;然而OEC、NSC移植组能测到P1波,其与SCI组完全消失的情况相比较,差异显著,P=0.001,≤0.001;然而,需注意的是,仅OEC移植组P1波的潜伏期较与假手术组比较明显延长,有统计学差异;而NSC移植组P1波的潜伏期与SCI组相比较,P=0.069,＞0.05,无统计学差异;OEC+NSC移植组P1波的潜伏期与OEC组和NSC组的相比较,P值分别为0.688、0.247,＞0.05,无统计学差异。进一步说明OEC+NSC移植对感觉神经生理功能恢复改善不明显。 3.2 MEP检测: 本实验中,假手术大鼠均能测到明显的诱发电位,这种诱发电位的波幅为均值在6mv左右,潜伏期5ms左右。而SCI后,波幅和潜伏期均测不到,MEP消失。但给予NSC或者OEC移植后,均能测到MEP。只是其潜伏期有些延长(说明传导速度减慢),且恢复波幅明显降低(说明突触功能受损)。细胞联合治疗对MEP没有明显影响。

Pifithrinα 4.植入细胞的存活:脊髓切片上可见到GFP标记的绿色荧光细胞。而联合移植组脊髓既可见绿色荧光细胞,又可见Hochest33342标记的细胞核。标记细胞在损伤脊髓瘢痕,及其上段、下端均可见到。说明移植细胞向头、尾侧迁移,并在宿主脊髓存活。 5.PCR扩增疤痕组织的神经营养因子及其受体,和凋亡相关因子的表达变化发现:①在疤痕组织中均未检测到BDNF、NT-3、bFGF、TrkA、TrkB表达;②NGF各时间点均没有变化。③凋亡基因变化:Bcl-2:在联合移植21d时与NSC移植组比较明显降低,P=0.011,＜0.05,差异有统计学意义;Caspas-3:联合移植组在14d与NSC移植组、OEC移植组相比较,明显增加(P=0.039、0.032,＜0.05),差异有显著统计学意义;但至在21d时,联合移植组与NSC移植组比较Caspas-3表达明显减P=0.006,＜0.01,差异有显著统计学意义;在28d时,各处理方式之间比较,差异无统计学意义。Bax在联合移植组14d时与NSC移植比较,明显增加,P=0.031,＜0.05,差异有统计学意义;但至21d时,联合移植组与手术组比较明显减少,P=0.040,＜0.05,差异有统计学意义;在28d时,各处理方式之间比较,差异无统计学意义。④NTF变化:CNTF在联合移植14d时,与OEC移植组及NSC移植比较表达明显增加,P值分别为0.007、0.001、0.023,均＜0.05,差异有显著统计学意义;在21d,联合移植组与NSC移植组比较明显减少,P值为0.000,＜0.01,差异有显著统计学意义;在28d,联合移植组与OEC移植组、NSC移植组比较均明显减少,P值分别为0.028、0.028,均＜0.05,差异有显著统计学意义。IGF-1:在14d时,联合移植组与OEC移植组及NSC移植比较,明显增加,尸值分别为0.003、0.001,均＜0.05,差异有显著性统计学意义;而在21d和28d时,各处理方式之间比较,差异均无统计学意义;PDGF-B:在14d时,联合移植组、OEC、NSC移植与手术组比较,明显减少,P=0.044,＜0.05,差异有统计学意义;联合移植组与NSC移植比较,明显减少,P=0.047,＜0.05,差异有统计学意义。在21d时,联合移植组与NSC移植组、OEC移植组及手术组比较明显减少,P=0.039、0.039、0.031,＜0.05,差异有统计学意义。在28d时,联合移植组与OEC移植组之间比较显著减少,P=0.011,＜0.05,差异有统计学意义。TGF-betal:在14d时,联合移植组与NSC移植组、OEC移植组和手术组比较明显增加,p=0.001、0.019、0.001,＜0.05,差异有统计学意义;而在21d和28d时,各处理方式之间比较,差异无统计学意义。Trkc:在14d时,联合移植组与NSC移植组比较,明显降低,P值分别为0.031,＜0.05,差异有统计学意义;在21时,联合移植组与手术组比较(P=0.015,＜0.05),和NSC移植组比较(P=0.010,＜0.05)。差异有统计学意义,而在28d时,各处理方式之间比较,差异无统计学意义。

有 可以看出,PDGF-B是细胞移植促进损伤脊髓修复中变化最明显的分子,提示其可能是细胞移植改进功能可塑性相关的重要分子。 6.OEC+NSC移植对恒河猴SCI功能恢复的影响 6.1后肢运动功能评分:改良的Tarlov’s Method评分结果显示损伤侧、细胞联合移植侧评分均较假手术组明显降低,有统计学差异(P＜0.05)。第1周、第2周、第3周、第4周、第7周,OEE+NSE移植细胞联合移植侧Tarlov’s Method评分均明显高于损伤侧评分,均有统计学意义(P＜0.05)。 6.2移植细胞在宿主脊髓存活和迁移情况:在宿主脊髓可观察到大量荧光细胞,向头端或尾端迁徙;说明移植细胞在宿主脊髓存活,迁移。 6.3神经电生理: CSEP:SCI后各组动物的CSEP信号均消失。损伤侧N1波波幅明显低于损伤对侧,有统计学差异(P＜0.05);而NSC联合OEC细胞移植1个月,细胞联合移植侧N1波幅明显高于损伤侧,有统计学意义(P＜0.

01)；14d达高峰(P＜0.01)；以后维持在较高水平，至35d仍明显高于A组(P＜0.01)。C组：TGF-β_1 mRNA的表达从1d至35d均较B组减弱(P＜0.05)；但所有时间点仍高于A组(P＜0.05)。 6．治疗前后染毒大鼠肺组织NF-κB活性的动态变化：A组大鼠肺组织NF-κB活性很低。B组大鼠肺组织NF-κB活性1d开始较A组显著升高(P＜0.01)；3d时达高峰(P＜0.01)；7d及14d时仍高于A组(P＜0.01)。C组NF-κB活性较B组明显减弱(P＜0.01)；在1d时最高，以后逐渐下降，在14d时与A组相比无统计学意义(P＞0.05)。 Raf抑制剂 7．染毒大鼠肺组织磷酸化p38MAPK蛋白的变化：A组大鼠肺组织磷酸化p38MAPK蛋白表达较少。B组大鼠肺组织磷酸化p38MAPK蛋白1d开始较A组显著升高(P＜0.01)；3d时达高峰(P＜0.01)；以后逐渐下降，21d及以后与A组相比无统计学意义(P＞0.05)。C组磷酸化p38MAPK蛋白表达1d至14d时较B组明显减弱(P＜0.01)；仅1d至7d时高于对照组(P＜0.05)；在14d时与A组相比无统计学意义(P＞0.05)。

结论：应用MT治疗，可明显降低百草枯中毒大鼠血清MDA含量，增加SOD及GSH-Px活力；减轻染毒大鼠肺组织早期的炎性改变及后期的肺纤维化趋势，这可能与MT较强的抗氧化功能以及降低肺组织NF-κB活性，减少TGF-β_1、磷酸化p38MAPK的表达，调节MMPs和TIMPs之间的平衡有密切关系。
第一部分高糖对培养的人脐静脉内皮细胞p38 MAPK信号系统表达的影响 目的:检测高糖对人脐静脉血管内皮细胞系p38MAPK信号系统表达的影响,从而探讨p38MAPK信号系统在高糖诱导糖尿病视网膜血管病变中的作用。 方法:以人脐静脉血管内皮细胞﹙HUVEC﹚为研究对象,模拟糖尿病状态,以高浓度葡萄糖刺激HUVEC,采用RT-PCR、Western-blot法检测细胞中p38MAPK、转化生长因子β2和基质金属蛋白酶活力和蛋白表达情况的变化,电镜观察超微结构及流式细胞仪检测细胞周期的变化。 结果:高浓度葡萄糖可使内皮细胞中p38MAPK、MMP-2和TGFβ2表达增加,超微结构及细胞周期发生变化。 结论:高糖诱导糖尿病视网膜血管病变可能部分通过p38MAPK信号系统表达增强。 第二部分p38 MAPK信号系统在实验性糖尿病仓鼠视网膜中的表达变化 目的:检测p38 MAPK信号系统在实验性糖尿病仓鼠视网膜中表达的变化,从而探讨p38 MAPK信号系统在糖尿病视网膜病变(diabetic

retinopathy DR)发生发展中的作用及其机制。 方法:用链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)诱导仓鼠糖尿病模型,HE染色观察光镜下视网膜的形态特征及变化,用免疫组织化学法检测正常对照组(非糖尿病动物组)和糖尿病动物模型组视网膜中TGF-β2的表达,电镜观察其超微结构的变化。血清学检测仓鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和电化学发光法检测胰岛素水平等变化。提取视网膜中总RNA,半定量RT-PCR观察视网膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ2 mRNA表达情况,Western-blot检测糖尿病仓鼠视网膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ2蛋白情况。 结果:糖尿病仓鼠不仅表现为高血糖,还表现为高TG血症。糖尿病仓鼠视网膜内TGF-β2表达呈阳性染色反应,视网膜超微结构出现膜盘结构分层,数量稀少;节细胞层内质网扩张,核周间隙扩大,细胞内线粒体肿胀等变化。糖尿病仓鼠视网膜中p38 PF-02341066供应商 MAPK、MMP-2和TGFβ2 mRNA表达呈升高趋势、蛋白表达增多,与正常对照组相比于造模后16周末时即差异具有统计学意义(P < 0.05)。 结论:此为研究p38 MAPK信号途径参与DR的发病机制提供了实验依据。
淋巴细胞作为免疫调节的中心环节,在炎症性肠病的发生和持久化中起重要作用。本课题采用半抗原诱发大鼠结肠炎模型,用蛋白质组学方法研究了淋巴细胞的蛋白表达差异谱。进一步研究了p38

MAPK信号通路在淋巴细胞免疫应答和细胞因子分泌中的作用。同时采用流式细胞术、RT-PCR及ELISA方法对中药肠泰有效部位治疗结肠炎的作用机制进行了研究。结果显示与细胞周期、增殖、信号转导、炎症、凋亡和代谢相关的蛋白分子参与了TNBS诱导的结肠炎中淋巴细胞的免疫应答过程。尤其是一系列与凋亡相关蛋白在结肠炎发病中起重要作用。P38 MAPK通路参与了TNBS诱发的结肠炎中肠系膜淋巴结T淋巴细胞免疫应答,该通路对IL-2、IFN-γ等细胞因子的表达进行了调控。中药复方肠泰有效部位可调节T淋巴细胞亚群比例、降低炎性介质和促炎细胞因子的分泌而发挥对结肠炎的抗炎和免疫调控作用,进而抑制炎症的发生。
近年来的研究证明,在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)的发病初期,病原体及代谢产物(如内、外毒素),尤其是炎症反应早期出现的细胞因子,可激活外源性凝血途径,导致弥漫性血管内凝血(DIC)。同时,疾病早期产生的大量凝血酶可促进血小板和中性粒细胞的聚集、黏附,加强内皮细胞和中性粒细胞之间的相互作用,加重炎症反应。在ALI/ARDS病程中原有的凝血与抗凝、纤溶与抗纤溶、炎症与抗炎之间的平衡被打破,凝血级联与炎症级联之间相互促进,形成一种自动放大的效应,使病情加重,为此干预凝血系统的异常对控制ALI/ARDS的病情发展具有重要意义。另外,ALI/ARDS时炎症反应的失控与p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路及核因子-κB FK228浓度 (NF-κB)的激活密切相关。已有研究证实了肝素除具备抗凝作用外,还有一定的抗炎、抗过敏作用,有关肝素对p38MAPK信号转导通路以及NF-κB活性影响的研究,国内外未见有相关报道。 目的:本实验拟应用目前常用的抗凝药肝素(包括低分子肝素)来治疗ALI/ARDS,同时,通过研究肝素对p38 MAPK信号转导通路及NF-κB活性的影响,进一步明确肝素对ALI/ARDS抗炎作用的分子机制。 方法:本实验采用新西兰大耳白兔48只,动物随机分为4组:对照组(A组)、内毒素组(B组)、内毒素+肝素组(C组)和内毒素+低分子肝素组(D组),每组12只。1.用大肠杆菌内毒素(LPS)制备大耳白兔急性肺损伤模型;2.用Nova Stst Profile M血气分析仪进行血气分析;3.用双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度;4. ELISA法测定血清血管内皮粘附分子-1(sICAM-1)的浓度;5.Western blots检测多形核中性白细胞(PMN)中磷酸化p38 MAPK的含量;6.电泳迁移率变动分析实验(EMSA)测定肺组织中NF-κB活性;7.计算肺干重和湿重比值(肺D/W)及观察肺组织病理学改变。观察肝素对ALI/ARDS的疗效,并通过研究肝素对TNF-α、sICAM-1表达、p38 MAPK基因信号转导通路、NF-κB活性的影响来进一步探讨其抗炎作用的分子机制。 结果: 1.

31%(46/58),不良反应发生率为5.17%(3/58),均明显优于对照组患者(P<0.05...
目的探讨VENTANA全自动免疫组化法(VENTANA IHC)和手工免疫组化法(手工IHC)检测肺腺癌中间变性淋巴瘤激酶(ALK)突变的差异性。方法采用VENTANA IHC和手工IHC分别检测120例肺腺癌患者肿瘤组织中ALK基因突变,并用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法进行验证。结果在120例病例中,采用VENTANA IHC、手工IHC和RT-PCR检测,EML4-ALK阳性的例数分别为14例(11.7%)、19例(15.8%)和15例(11.6%)。与RT-PR相比较,VENTANA IHC检测的敏感性和特异性分别为93.3%和100%,二者之间的总符合率为99.1…
2011年在恶性肿瘤治疗方面是一个特殊的年份。40年前美国总统作出了”对癌症的战争”国家的宣言。从政府层面上对癌症研究及临床诊治进行了非常大的投资。如今癌症患者的存活率已得到显著的增加,三分之二的患者存活达五年以上。今年,美国临床肿瘤学会公布了54个重要的肿瘤临床研究,其中多项重大进展引起大家的关注。
肺癌是全球最常见的癌症之一,2008年有160万新增病例,而每年有138万人死于肺癌(占癌症总死亡人数的18.2%)。肺癌是我国发病率最高的癌症,年发病率为35/10万(即每十万人就有35人患肺癌),其中非小细胞肺癌(NSCLC)约占80%。2012年中国肿瘤登记年报显示肺癌发病率和死亡率均为第一位,并且其发病率和死亡率呈几个特点:第一,发病率和死亡率在不断增长;第二,发病年龄年轻化;第三,女性肺癌发病增长比较明显;第四,肺腺癌增长比较明显;第五,早期诊断率与过去二十年比较提高得不多。目前,NSCLC治疗使用的一线治疗是基于铂类化合物的联合治疗,即
肺癌是我国常见和死亡率最高的恶性肿瘤,非小细胞肺癌(Non-small

寻找更多 Cell LungCancer,NSCLC)是肺癌中最常见的类型。临床上就诊的非小细胞肺癌,约30%为早期,20%为局部晚期,50%为晚期。一般而言,早期肺癌以手术治疗为主,局部晚期为化放疗
目的在晚期非小细胞肺癌(NSCLC)中,c-Met扩增和T790M突变是EGFR-TKIs获得性耐药最常见的两种分子生物学机制。而c-Met过表达能否作为获得性耐药患者靶向治疗的生物标志物目前尚不清楚。方法晚期非小细胞肺癌(NSCLC)EGFR-TKIs获得性耐药的患者,采用IHC的方法检测c-Met
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Objective: 哪里 The echinoderm microtubule-associated protein-like 4-anaplastic lymphoma kinase (EML4-ALK) CB-839 fusion oncogene defines a novel molecular subset of non-small cell lung cancer
近年来,分子靶向抗肿瘤药物的学术价值、社会效益及经济效益得到不断体现和确证,已经成为当今国际抗肿瘤药物研究和开发的主流。分子靶向药物是区别于传统细胞毒类药物的新型抗肿瘤药物,主要作用于在正常细胞和肿瘤细胞中差别巨大的调控细胞增殖生长的关键分子及其信号转导通路,具有对肿瘤的选择性高、毒
In spite of a worldwide decrease in the incidence of gastric cancer, this malignancy still remains

one of the leading causes of cancer mortality. Great efforts have been made to improve treatment outcomes in patients with metastatic gastric cancer, and the introduction of trastuzumab has greatly improved the overall survival. The trastuzumab treatment took its first step in opening the era of molecular targeted therapy, however several issues still need to be resolved to increase the efficacy of targeted therapy. Firstly, many patients with metastatic gastric cancer who receive trastuzumab in combination with chemotherapeutic agents develop resistance to the targeted therapy.

100±5.657、18.980±2.031,对照组分别为0.985±0.015、0.995±0.005(P均
神经干细胞移植替代治疗已经成为治疗中枢神经损伤的一个重要手段,但其细胞来源由于伦理学和免疫排斥等问题而受到了限制。既往研究认为,非神经细胞不能转变成神经细胞。但诱导型多潜能干细胞出现之后,研究发现,通过细胞基因重编程技术可以将鼠和人的自身体细胞诱导转分化为神经干细胞或各种类型的神经元,从而避免了细胞移植治疗中相关的伦理学问题和免疫排斥反应,表明细胞基因重编程在中枢神经损伤修复中具有很好的应用前景。本文对细胞基因重编程技术在诱导神经干细胞或神经元形成方面的相关研究进展及其在中枢神经损伤修复中的应用进行了综述。
为探索金黄色葡萄球菌(S.aureus)对奶牛乳腺成纤维细胞(BMFB)TGF-β1/Smad信号通路及其转分化的影响,用热灭活金黄色葡萄球菌(0、10~4、10~5、10~6、10~7和10~8

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selleck公司 CFU·mL~(-1))刺激BMFB,24h后采用Real-time PCR方法检测TGF-β1、α-SMA和collagen-ⅠmRNA的转录量,Western blot方法检测α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3蛋白的表达量。使用TGF-β1受体特异性抑制剂SB-431542预处理细胞,再用10~5 CFU·mL~(-1)热灭活金黄色葡萄球菌刺激细胞,24h后采用Real-time PCR方法检测α-SMA和collagen-ⅠmRNA的转录量,Western blot方法检测α-SMA、collagen-Ⅰ及p-Smad2/3蛋白的表达量,免疫荧光法检测collagen-Ⅰ蛋白的表达量。结果显示,不同浓度热灭活金黄色葡萄球菌处理细胞的TGF-β1mRNA的转录量显著升高(P<0.05或P<0.05或P
目的 :研究骨髓中肿瘤相关成纤维细胞(carcinoma-associated fi broblast,CAF)在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)化疗抵抗中的作用,并初步探讨其作用机制。方法 :首先用重组人转化生长因子β1(recombinant human transforming growth factorβ1,rh TGFβ1)体外诱导AML患者的骨髓间充质干细胞(bone marrow-mesenchymal stem cells,BM-MSCs)形成CAF,蛋白质印迹法检测CAF中α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、成纤维细胞激活蛋白(f ibroblast activation protein,FAP)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)及Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)的分泌水平。然后构建CAF与AML细胞系THP-1或K562的共培养模型,锥虫蓝染色法检测经阿糖胞苷(cytosine 哪里 arabinoside,Ara-C)化疗后白血病细胞的活性变化,FCM法分析白血病细胞的凋亡率和细胞周期分布情况。进一步应用TGFβ受体拮抗剂SB431542处理人白血病细胞系THP-1或K562,然后再与CAF共培养,采用锥虫蓝染色法检测CAF对白血病细胞抵抗Ara-C化疗的保护作用。结果

:TGFβ1可在体外诱导BM-MSCs分化形成CAF;与BM-MSCs相比,CAF高分泌α-SMA、FAP、collagenⅠ和collagenⅢ蛋白(P值均<0.01)。共培养实验结果表明,CAF细胞可明显减弱白血病THP-1和K562细胞对Ara-C的敏感性(P值均<0.05)。受体拮抗实验表明,SB431542处理能够显著减弱CAF对白血病细胞抵抗化疗的保护作用(P
视网膜色素上皮细胞的变性、坏死将导致患者的视力丧失。由于视网膜色素上皮细胞不能再生,移植健康的视网膜色素上皮细胞已成为视网膜变性性疾病最具有前景的治疗策略。随着化学、分子生物学和再生医学的发展,人们发现越来越多的小分子化合物通过调控某些特定的信号通路,能够操纵干细胞的分化方向。本文主要对小分子化合物在体外诱导干细胞定向分化为视网膜色素上皮细胞的应用作一综述。
本文主要对TGFβ与AngⅡ在血管平滑肌细胞表型转化及胶原分泌中的作用进行综述,以为临床实践提供参考。
目的观察毛蕊异黄酮对TGF-β1/Smads信号通路的影响,探讨毛蕊异黄酮抗肝星状细胞活化的作用机制。方法以人肝星状细胞株(LX-2)为研究对象,采用高内涵系统观察细胞增殖(Ed U)及细胞内F-actin骨架的聚合情况,RT-PCR法检测细胞I型胶原(Col-Ⅰ)、α-SMA、TGF-β1mRNA表达水平,Wstern-blot法检测细胞内p-Smad2、Smad2及Smad7蛋白表达水平。结果

TGF-β1可显著促进LX-2细胞增殖、活化,Ed U阳染细胞明显增加,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2及Col-ⅠmRNA或蛋白表达显著增加(P均
背景:诱导小鼠多潜能性干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞能有效改善糖尿病小鼠血糖水平。目的:在体外将诱导型多能干细胞定向分化的胰岛样细胞团进行相关分子及蛋白水平检测,并观察其在体外和体内胰岛素分泌情况。方法:将体外培养的小鼠诱导型多能干细胞采用联合诱导剂分3个阶段对其进行诱导分化,并对每个诱导阶段形成的内胚层细胞、胰岛前体细胞和成熟胰岛细胞进行形态学观察和PCR检测相关基因的表达水平。对成熟的胰岛样细胞团进行双硫腙染色,ELISA检测体外释放胰岛素功能。将获得的胰岛素分泌细胞移植到糖尿病小鼠肾包膜下,观察其血糖水平变化。结果与结论:(1)体外成功获得的小鼠胰岛样细胞团,其结构呈球形,双硫腙染色呈铁红色,PCR检测到在m selleck screening library RNA水平上表达胰岛素基因;(2)ELISA检测到胰岛样细胞团在受到葡萄糖刺激时能够分泌胰岛素;(3)通过肾包膜方法将细胞团移植到1型糖尿病小鼠体内,对小鼠高血糖有明显的调控作用。
转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)在心肌纤维化发生、发展过程中具有促进肌性成纤维细胞的转化,促进胶原基因表达,促进细胞外基质合成与沉积等作用,是最重要的促心肌纤维化细胞因子之一。大量研究证实,TGF-β/Smads信号转导通路是TGF-β发挥生物学作用的主要通路,其分子组成与分子调节复杂,与其他信号通路存在广泛的交互影响,对心肌纤维化的发生和发展有明确的作用,对TGF-β信号转导通路的深入研究不仅使心肌纤维化的发病机制得到进一步的阐明,也给心肌纤维化的防治研究提供了新的有效途径。
目的探讨体外定向诱导胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)向内皮细胞分化的条件,为组织工程血管提供种子细胞。方法取怀孕12.

0软件对49个2,4-二芳基氨基吡啶类似物化合物进行三维定量构效关系(3D-QSAR)研究及蛋白质分子对接(Docking)研究,用数据阐述模型的可靠性,对后续类似ALK磷酸激酶抑制剂的研究起到至关重要的作用。论文第五章,对于文章的中心思想进行了总结,阐明用计算机辅助药物设计的方法对于ALK磷酸激酶抑制剂的研究具有重大的意义。
在癌症的化疗与靶向药物的治疗过程中,普遍存在耐药性问题。目前,研究者通常通过建立耐药细胞系模型,研究耐药性机制和筛选耐药基因标志。然而,现有的耐药细胞系分析方法存在很大的缺陷,其中两个主要的问题是(1)缺乏判断耐药细胞系模型是否建立成功的金标准(gold

PR-171 standard);(2)在耐药与敏感细胞系间选择差异表达基因的方法普遍缺乏严格的统计控制。这些问题可能是导致不同研究工作找到的耐药基因表达标志不具有可重复性的重要原因。针对此问题,本文以癌细胞系耐药模型为主要研究对象,提出了一种细胞系分析方法,从多组用不同处理方法建立的耐药细胞系中筛选具有显著可重复性的耐药关键基因。本文主要研究内容分为以下两个部分:第一部分针对之前工作中采用的人为设定倍数差异(Fold Change,FC)阈值的方法存在的不确定问题,提出由技术重复细胞系样本(replicates)获得的耐药相关基因的可重复性判断的统计模型,用于评估由耐药细胞系的样本获得的差异基因的可靠性。然后,在几套培养处理模式各不相同的独立细胞系数据中分别筛选差异表达基因,并评价其差异表达模式(上、下调方向)一致的基因,将其作为耐药基因标志。最后,寻找几套数据集的差异基因富集到的具有重现性的功能类,分析耐药性影响的相关功能。在第二部分中,针对三类临床常见的癌症治疗药物(他莫昔芬、奥沙利铂和厄洛替尼)的耐药细胞系模型,我们应用上述算法分别在其中筛选耐药基因表达标志。在他莫昔芬耐药的乳腺癌细胞系中,我们确定了91个与他莫昔芬耐药相关的基因表达标志,并发现了他莫昔芬耐药性的产生主要与溶酶体、RNA运输等功能相关;在奥沙利铂耐药的结肠癌细胞系中,我们发现了20个与奥沙利铂耐药相关的基因表达标志,其耐药性的产生与mRNA修饰、碱基替换或颠换编辑相关;在厄洛替尼耐药的肺癌细胞系中,我们找到了18个与厄洛替尼耐药相关的基因表达标志,且发现厄洛替尼耐药性的产生会扰动细胞扩增相关的功能。
目的:(1)探讨碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(b FGF单抗)联合Lobaplatin(LBP)对肺癌细胞系A549细胞增殖、凋亡和转移的影响及其可能的作用机制。(2)系统评价Lobaplatin联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效和安全性。方法:制备腹水型bFGF单抗,体外培养肺腺癌A549细胞,将细胞分为四组(control组、b

并且 FGF单抗组、LBP组及b FGF单抗+LBP组)处理48h。(1)CCK-8法测定其对A549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测药物作用后细胞周期分布的变化,Western blot法检测细胞周期相关蛋白CDK4和cyclin D的表达水平。(2)流式细胞仪检测药物作用A549细胞凋亡,DAPI染色激光共聚焦显微镜下观察细胞凋亡过程中细胞核的变化,western blot法检测细胞凋亡PI3K/Akt信号通路有关蛋白bcl-2、caspase-3、caspase-9、PARP及BAX、cleave-caspase-3、cleave-caspase-9、cleave-PARP的表达变化。(3)划痕实验及Transwell小室检测不同药物分组对A549细胞侵袭及迁移能力的影响,Western Osimertinib solubility dmso blot法检测细胞侵袭迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9的表达。(4)计算机检索Cochrane Library、Pub Med、EMBase、中国期刊全文数据库(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)、维普中文期刊数据库、万方数据库,纳入LBP联合化疗对比顺铂联合化疗治疗晚期NSCLC的随机对照试验(PCT),根据纳入与排除标准筛选后,运用改良后的Jadad量表评价纳入文献的方法学质量,并采用Cochrane协作网提供的Rev

Man5.2统计学软件进行Meta分析。结果:(1)CCK-8结果显示不同的药物分组可抑制A549细胞的增殖,并以bFGF单抗+LBP对肺癌A549细胞增殖作用最为明显,流式细胞仪检测结果发现b FGF单抗联合LBP可抑制A549细胞周期的进行,阻止细胞周期在G0/GI期。Western blot检测结果表明b FGF单抗和LBP可下调细胞内CDK4和cyclin D的表达。(2)流式细胞仪检测结果显示b FGF单抗,LBP单独及联合可诱导A549细胞凋亡。DAPI染色激光共聚焦显微镜下发现可引起细胞核固缩、核裂解。Western blot结果表明b FGF单抗联合LBP通过下调bcl-2、casepase-3、casepase-9、PARP的表达,上调BAX、cleave-casepase-3、cleave-casepase-9、cleave-PARP的表达来诱导A549细胞的凋亡。(3)划痕实验和Transwell小室基质胶实验显示b FGF单抗,LBP单独及联合可抑制A549细胞侵袭迁移能力。Western blot检测结果发现药物作用后可下调MMP-2和MMP-9蛋白表达来阻断细胞的侵袭迁移。(4)共纳入11项RCT,合计724例患者。Meta分析结果显示,试验组患者的客观缓解率[RR=0.96,95%CI(0.79,1.16),P=0.65]、白细胞减少发生率[RR=0.95.,95%CI(0.83,1.08),P=0.42]和血小板减少发生率[RR=0.96,95%CI(0.80,1.15),P=0.68]与对照组比较差异无统计学意义;但试验组患者恶心呕吐发生率[RR=0.55,95%CI(0.46,0.

05)；与I／R组相比,1h、2h、4h、24hRPCT组脑梗死体积显著缩小(P0.05)；Garcia法显示30minRPCT组与I／R组评分无差异(P>0.05),其余RPCT组与I／R组之间有显著差异(P0.05)；RPCT组Garcia神经功能缺陷评分显著增高(P<0.05)。(2)HE染色：sham组脑组织神经元形态正常；RPCT组及I／R组脑缺血核心区的神经元数目稀少且核固缩深染,组织疏松；与I／R组相比,1hRPCT组和24hRPCT组脑缺血半影区的神经元层次较清楚,间质水肿减轻,细胞数目较多且形态较完整。(3)Nissl染色：sham组神经元形态正常；1hRPCT组和24hRPCT组缺血半影区的神经细胞存活数目比I／R组明显增加(P0.05)；与I／R组相比,1hRPCT组和24hRPCT组缺血半影区p-P38蛋白、Bcl-2蛋白的表达量显著增加(P
研究背景和目的： 创伤愈合是一个复杂的过程，包括炎症反应、细胞增殖和组织重建三个互相重叠的阶段。损伤自身作为一个信号启动修复机制至愈合完成。传统的观念认为创伤后首先启动的是止血过程，继之炎症细胞先后趋化至创面局部，参与创伤修复中的炎症反应。但最近研究发现活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）在调节创伤后早期炎症反应中具有重要的作用，ROS依赖的氧化还原系统是启动创伤修复级联反应中必不可缺的环节, ROS可以作为第二信使参与调节信号转导及调节基因表达等作用。

创伤后早期炎症反应的主要炎症介质有5－羟色胺及前列腺素E2（ProstaglandinE2,PGE2）等，其中创伤局部的红、肿、热、痛主要与PGE2的产生相关。但创伤后PGE2快速升高的分子机制目前仍然不清。因此，本研究拟采用体外人皮肤角质细胞机械损伤模型，观察角质细胞损伤后ROS的产生，探讨ROS下游及上调PGE2上游的信号通路，试图阐明ROS介导的信号途径在创伤修复中早期炎症反应的作用机制。 Rigosertib浓度 第一部分皮肤角质细胞损伤后升高的ROS上调PGE2 目的研究人皮肤角质细胞机械损伤ROS生成增加对PGE2分泌的影响 方法 1、体外培养人皮肤角质细胞至第3-8代，利用该细胞建立机械损伤模型； 2、将人皮肤角质细胞分为三组：a）单纯损伤组（接受机械损伤组）；b）Nox抑制剂（DPI）预处理+损伤组；

c）无处理组（对照组）； 3、机械损伤后0、1、5、10、15、30、60min收集细胞样本，荧光探针技术检测各组细胞ROS的生成； 4、机械损伤后0、1、2、4、6、8、12、24h收集各组细胞上清液，EIA法检测PGE2含量的变化。 结果 1、在建模后不同时间点，损伤组人皮肤角质细胞ROS生成明显高于对照组，在损伤后1min开始有ROS生成，30min时点达到峰值（P<0.05），PD98059预处理组产生PGE2均较损伤组显著降低（p<0.05），NS398预处理组产生PGE2均较损伤组显著降低（p
目的： 通过构建子宫内膜异位症的体内、体外模型,研究人参皂苷Rh2对实验性子宫内膜异位症的治疗作用,并探讨人参皂苷Rh2对子宫内膜异位症的作用机制。 方法： 1.大鼠适应性饲养一周后,阴道涂片,记录动情间期的变化,选取动情周期规则的SD大鼠进行造模实验,采用外科自体移植法构建SD大鼠子宫内膜异位症模型,术后恢复三周后开腹探查子宫异位内膜生长状况。 2.造模成功的SD大鼠随机分为五组,分别为模型对照组(0.5%CMC-Na)、阳性对照组(孕三烯酮1.5mg/kg)、Rh2低、中、高剂量组(5mg/kg、10mg/kg、40mg/kg)。在连续灌胃给药21天后再次开腹,测量异位内膜长宽高并计算其体积。 CDK inhibition 3. EMs模型SD大鼠解剖后腹主动脉取血,酶联免疫法(ELISA)测定大鼠体内的雌二醇(E2)、孕酮(P)和抗子宫内膜抗体(EMAb)水平,HE染色观察异位内膜病理组织学改变,Western blot法测定各组动物移植异位内膜的Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9表达的变化。 4. EMs患者的子宫内膜组织经Ⅱ胶原酶消化后,过筛后人子宫异位内膜细胞进行体外培养,建立人子宫内膜异位症的体外细胞模型。 5.用无酚红DMEM/F12培养液(含10%活性炭吸附FBS)培养人子宫异位内膜细胞,用不同浓度的Rh2(0.0001-100μmol/L)作用于离体培养的人子宫异位内膜细胞24h、48h和72h,分析人参皂苷Rh2对人子宫异位内膜细胞生长的影响。 6.采用R&D蛋白芯片检测溶剂对照组(DMSO)和Rh2(30μmol/L)组磷酸化蛋白激酶表达的差异,筛选出主要的差异性表达激酶,并用Real-time

RT-PCR技术验证蛋白芯片的结果,研究人参皂苷Rh2对人子宫异位内膜细胞磷酸化激酶的影响。 7.利用Western blot技术检测溶剂对照组(DMSO)和Rh2(30μmol/L)组蛋白表达差异性(pp38,pSrc,Bcl-2,Bax等),并比较存在特异性拮抗剂下,各蛋白水平表达的差异。 结果： 1.在连续给予21天0.5%CMC-Na、孕三烯酮(1.5mg/kg)和不同剂量Rh2后,模型对照组异位内膜体积明显增大,而孕三烯酮组和人参皂苷Rh2低、中、高剂量组(5,10、40mg/kg)异位内膜生长受到抑制,异位内膜体积减小。人参皂苷Rh2(40mg/kg)能显著抑制大鼠子宫异位内膜的生长(P
目的：静脉注入胆红素建立高胆红素血症动物模型，探讨胆红素对脾细胞磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular 一般 regulatedproteinkinases，p44/42mitogen activated protein kinases，p44/42MAPK，p-ERK)，NF-κB抑制蛋白α（Inhibitor of nuclear factor kappa-B，NF-kappaB inhibitor，IκBα）表达的影响。方法：1.实验分组：选用7～8日龄清洁级新生SD大鼠，雌雄不限，随机分为空白对照组（Ⅰ）、脂多糖对照组（LPS，Ⅱ）、15mg/kg胆红素对照组（Ⅲ）、15mg/kg胆红素+脂多糖组（Ⅳa）、30mg/kg胆红素+脂多糖组（Ⅳb）和50mg/kg胆红素+脂多糖组（Ⅳc），共6组，每组24只，每组分成2h、5h、24h三个时间点，每个时间点8只。2.建立新生大鼠高胆红素血症模型：⑴颈静脉注射不同剂量胆红素（15mg/kg、30mg/kg和50mg/kg），空白对照组和脂多糖组经颈静脉注射生理盐水（0.1ml）,缝合颈部切口；⑵在颈静脉给药后1h，空白对照组给予腹腔注射0.